商品簡介
序
全書共100多個實驗,內容設置與陳鈞輝教授等編著的《普通生物化學》第五版教材一致,該理論教材人選為“十二五”普通高等教育本科國家級規劃教材。實驗內容包括糖、脂、蛋白質、核酸、酶、維生素、激素、物質代謝與生物氧化,以及綜合實驗。本書除了涵蓋生物化學研究中常用的方法和技術外,還包括科研中的一些新技術和新方法。
在修訂過程中,為了不增加篇幅,我們將有些生物化學儀器分析的內容,如自動生化分析儀的使用、臨床生化指標的自動測定等放在科學出版社的教學服務網站上,以拓展學生的知識面,增加一些臨床生化檢驗的知識,網站上還有16個生物化學實驗操作流程的視頻,供學生觀看。
本書內容較多,還有一些較大型的實驗和綜合實驗,不同學校、不同專業可根據具體條件選做。
本書是南京大學生物化學國家精品課程的配套教材,在修訂過程中受到教育部下撥的國家精品課程建設經費的資助。王傳懷教授、何執靜副教授為本書的修訂提供了許多幫助;袁玉蓀教授、朱婉華副教授曾負責和參加本書早期的編寫工作;焦瑞清、袁達文、唐惠煒、李俊和張冬梅老師拍攝了生物化學實驗的視頻,在此一併致謝。
由於我們水平有限,書中錯誤和不足仍屬難免,敬請讀者批評指正。
目次
第五版前言
第四版前言
第一章醣類
實驗1糖的顏色反應
實驗1.1莫氏實驗
實驗1.2塞氏實驗
實驗1.3杜氏實驗
實驗2糖的還原作用
實驗3血糖的定量測定(Folin-Wu法)
實驗4血糖的定量測定(Folln-Malmros法)
實驗5血糖的定量測定(葡萄糖氧化酶法)
實驗6血液中葡萄糖的測定(鄰甲苯胺法)
實驗7葡萄糖含量測定(苯酚法)
實驗8蒽酮比色定糖法
實驗9植物組織中可溶性總糖的測定(蒽酮比色法)
實驗10總糖和還原糖的測定(3,5-二硝基水楊酸法)
實驗11多醣的實驗
實驗12果膠的提取與果膠含量的測定
實驗13肝素鈉的定量測定
實驗14糖的旋光性和變旋現象
第二章脂質
實驗15脂肪的組成
實驗16卵磷脂的提取和鑑定
實驗17粗脂肪含量的測定(Soxhlet抽提法)
實驗18碘價的測定(Hanus法)
實驗19皂化價的測定
實驗20脂肪酸價的測定
實驗21脂肪乙酰價的測定
實驗22血清膽固醇的定量測定(磷硫鐵法)
實驗23血清總膽固醇的測定(鄰苯二甲醛法)
實驗24血清膽固醇的定量測定(醋酸酐法)
實驗25血清甘油三酯簡易測定法
實驗26血清甘油三酯的測定(GPO-PAP法)
實驗27丙二醛(MDA)的測定
第三章蛋白質
實驗28蛋白質的顏色反應
實驗29蛋白質的沉澱反應
實驗30蛋白質濃度測定(微量凱氏定氮法)
實驗31蛋白質濃度測定(雙縮脲法)
實驗32蛋白質濃度測定(Folin酚試劑法)
實驗33蛋白質濃度測定(紫外光吸收法)
實驗34蛋白質濃度測定(考馬斯亮藍結合法)
實驗35非蛋白氮(NPN)的測定
實驗36甲醛滴定法
實驗37 DNP-氨基酸的製備和鑑定
實驗38 DNS-氨基酸的製備和鑑定
實驗39用DNS法鑑定蛋白質或多肽的N-端氨基酸
實驗40用DNS法測定多肽的氨基酸組成
實驗41肽的序列分析(PTH法)
實驗42甲硫氨酰甘氨酸二肽的合成
實驗43尿素對蛋白質的變性作用
實驗44氨基酸紙層析法
實驗45氨基酸微晶纖維素薄板層析法
實驗46離子交換柱層析法分離氨基酸
實驗47血清白蛋白的分離與純化
實驗48凝膠層析法分離純化蛋白質
實驗49 DEAE-Sephadex A-25分離純化多肽
實驗50親和層析法分離純化單克隆抗體
實驗51醋酸纖維薄膜電泳法分離血清蛋白質
實驗52血清糖蛋白醋酸纖維薄膜電泳
實驗53牛乳中酪蛋白和乳糖的製備與鑑定
實驗54聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳法分離血清蛋白質
實驗55聚丙烯酰胺凝膠垂直平板電泳法鑑定胰島素
實驗56 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質的相對分子質量
實驗57用等電聚焦電泳法測定蛋白質等電點
實驗58對流免疫電泳法測定胎兒甲種蛋白質
實驗59火箭免疫電泳法
實驗60 Western印跡
實驗61酶聯免疫吸附測定(ELISA)
第四章核酸
實驗62核酸的定量測定(定磷法)
實驗63酵母RNA的提取
實驗64 RNA的定量測定(苔黑酚法)
實驗65動物肝臟中DNA的提取
實驗66 DNA的定量測定(二苯胺法)
實驗67 5'-核苷酸的定量測定(過碘酸氧化法)
實驗68 DEAE-纖維素薄板層析法測定核苷酸
實驗69腺苷三磷酸的定量測定(紙電泳法)
實驗70核酸的酶法降解以及葡聚醣凝膠層析法製備5'-單核苷酸
實驗71質粒DNA的提取
實驗72 DNA瓊脂糖凝膠電泳
第五章酶
實驗73影響酶促反應的因素——溫度、pH、激活劑及抑製劑
實驗74胰蛋白酶米氏常數的測定
實驗75膽鹼酯酶米氏常數的測定
實驗76過氧化氫酶米氏常數的測定
實驗77用正交法測定幾種因素對酶活力的影響
實驗78胰蛋白酶抑製劑苯甲基磺酰氯對胰蛋白酶的抑製作用
實驗79溶菌酶的提純結晶和活力測定
實驗80豬胰糜蛋白酶的製備和純度鑑定
實驗81大腸桿菌鹼性磷酸酶的製備
實驗82鹼性磷酸酶的提取和分離及比活力測定
實驗83瓊脂糖凝膠電泳法分離乳酸脫氫酶同工酶
實驗84聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離乳酸脫氫酶同工酶
實驗85肝臟谷丙轉氨酶活力測定
實驗86血清穀丙轉氨酶活力測定
實驗87固定化5'-磷酸二酯酶的製備及其在分離核苷酸中的應用
第六章維生素
實驗88維生素A的定性測定
實驗89維生素B1的定性測定
實驗90維生素C的定量測定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
實驗91維生素C的定量測定(磷鉬酸法)
實驗92核黃素(維生素B2)熒光光度定量測定法
實驗93胡蘿蔔素的定量測定
實驗94熒光法測定核黃素結合蛋白一核黃素的解離常數
第七章激素
實驗95尿中17-羥皮質類固醇的測定(Porter-Silber法)
第八章物質代謝與生物氧化
實驗96肌糖原的酵解作用
實驗97脂肪酸的β-氧化
實驗98華氏(Warburg)呼吸儀瓶常數的測定
實驗99 L-谷氨酸的酶促脫羧作用(測壓法測定L-谷氨酸)
實驗100發酵過程中無機磷的被利用和ATP的生成(ATP的生物合成)
第九章綜合實驗
實驗101用高效液相層析(HPLC)定量測定胰島素中的氨基酸
實驗101.1胰島素的酸水解
實驗101.2用HPLC定量測定胰島素水解產物中的氨基酸
實驗102維生素C對過氧化氫(H2O2)誘導的小鼠巨噬細胞氧化損傷的保護作用
實驗102.1小鼠腹腔巨噬細胞的收集與培養
實驗102.2 MTT法測定巨噬細胞死亡率
實驗102.3活性氧檢測試劑盒探測細胞內活性氧的水平
實驗102.4 NO和NO合成酶活性的測定
實驗103酵母醇脫氫酶的提純及其性質的研究
實驗103. 1酵母醇脫氫酶的提純
實驗103.2酵母醇脫氫酶的凝膠層析
實驗103.3酵母醇脫氫酶的專一性
實驗103.4酵母醇脫氫酶的動力學研究
實驗104 α-澱粉酶的分離純化、鑑定和Km、Vmax的測定
實驗104.1 α-澱粉酶的活力測定
實驗104.2 α-澱粉酶的疏水層析
實驗104.3 α-澱粉酶的離子交換柱層析
實驗104.4聚丙烯酰胺凝膠垂直平板電泳法鑑定a澱粉酶
實驗104.5米氏常數(Km)和最大反應速度(Vmax)的測定
實驗105螺旋藻藻藍蛋白的分離、純化與鑑定
實驗105.1螺旋藻粗藻藍蛋白的製備
實驗105.2離子交換柱層析法分離藻藍蛋白
實驗106原花色素的提取、純化與測定
實驗106.1山楂原花色素的提取
實驗106.2原花色素的測定(Ⅰ)
實驗106.3原花色素的測定(Ⅱ)
實驗107熊果酸的製備和測定
實驗107.1山楂熊果酸的製備
實驗107.2熊果酸含量測定
實驗108鎳化合物誘導人Jurkat細胞凋亡途徑的研究
實驗108.1 Jurkat細胞的培養
實驗108.2 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡
實驗108.3 RT-PCR檢測凋亡相關基因bcl-2的表達
實驗108.4酶聯免疫吸附檢測Bcl-2蛋白表達水平
第十章臨床生化指標的自動測定(見科學出版社教學服務網站)
附錄
一、生物化學實驗須知
二、玻璃儀器的洗滌及一些常用的洗滌劑
三、移液器的使用
四、吸管的使用
五、過濾和離心
六、930型熒光光度計的使用
七、UV2600紫外可見分光光度計的使用
八、自動生化分析儀(見科學出版社教學服務網站)
九、全自動免疫分析儀TOSOH AIA 2000標準化操作規程(見科學出版社教學服務網站)
十、血紅蛋白檢測儀Bio-Rad D-10標準化操作規程(見科學出版社教學服務網站)
十一、實驗室常用酸鹼的相對密度和濃度
十二、常用酸鹼指示劑
十三、緩衝液的配製
十四、恆沸鹽酸的製備
十五、大腸桿菌丙酮粉的製備
十六、生物化學中某些重要化合物的Mr及pK值
十七、氨基酸的一些物理常數
十八、某些蛋白質的物理性質
十九、化學元素的相對原子質量表
二十、離心機轉速(r/min)與相對離心力(RCF)的換算
二十一、硫酸銨飽和度的常用表
二十二、常用離子交換劑
二十三、常用凝膠過濾層析介質
二十四、汞的密度
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