臨床分子生物學檢驗技術實驗指導（簡體書）

第一部分 分子生物學檢驗技術實驗室
一、分子生物學檢驗技術實驗須知
二、分子生物學檢驗技術實驗室介紹
三、分子生物學檢驗技術常用儀器介紹
四、分子生物學實驗室生物安全

第二部分 核酸的分離與純化
實驗1 真核基因組DNA的分離與純化
實驗2 真核細胞mRNA的分離與純化
實驗3 質粒DNA的提取
實驗4 核酸的鑒定

第三部分 核酸擴增技術
實驗5 聚合酶鏈反應
實驗6 PCR-RF1P檢測線粒體DNAA3243G異質性突變
實驗7 等位基因特異性擴增法檢測結核分枝桿菌rpoB基因突變
實驗8 TRAP一銀染法檢測端粒酶活性
實驗9 多重PCR檢測測a-地中海貧血基因缺失
實驗10 PCR-SSCP檢測苯丙酮尿癥苯丙氨酸羥化酶基因外顯子7突變
實驗11 實時熒光定量PCR檢測乙型肝炎病毒（HBv）核酸
實驗12 逆轉錄．聚合酶鏈反應檢測甘油醛-3-磷酸脫氫酶mRNA

第四部分 核酸分子雜交技術
實驗13 探針的制備
實驗14 DNA分子雜交
實驗15 RNA分子雜交
實驗16 熒光原位雜交
實驗17 反向斑點雜交法檢測B-地中海貧血

第五部分 分子克隆技術
實驗18 DNA的限制性內切酶酶切反應
實驗19 目的片段的連接
實驗20 感受態細胞的制備及重組子轉化
實驗21 重組子的鑒定

第六部分 其他分子檢驗技術
實驗22 真核細胞基因轉染技術
實驗23 Western印跡
實驗24 雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳
實驗25 H1A基因分型
實驗26 乙型肝炎病毒基因分型(芯片法)
實驗27 PCR-熒光探針法檢測CYP2C19基因多態性

第七部分 創新性實驗、設計性實驗及綜合性實驗
實驗28 采用導流雜交基因芯片技術進行人乳頭瘤病毒基因分型
實驗29 采用多重連接依賴探針擴增技術檢測抗肌萎縮蛋白基因突變
實驗30 人肝癌相關microRNA一21的定量檢測
實驗31 熒光素酶報告基因的制備
實驗32 基因重組
附錄 分子生物學檢驗技術實驗中常用試劑和緩衝液的配制

《臨床分子生物學檢驗技術實驗指導》：
三、分子生物學檢驗技術常用儀器介紹（一）微量移液器微量移液器（pipette）是分子生物學中最常用的計量儀器。其工作原理是通過內部密封的不銹鋼活塞和彈簧，用手指按壓和放松按鈕來吸取和排出液體。在使用移液器的過程中，應注意以下幾方面：①必須根據設計容量選用適當型號的移液器，調整數輪的讀數不得超過其標稱的容量範圍，否則會損壞移液器；②吸取不同類別的溶液應更換吸頭，防止試樣之間交叉污染，不同個體的體液標本也應更換吸頭，否則會嚴重影響檢驗結果；③新吸頭在使用前可吸排溶液幾次，浸漬吸頭以消除測量誤差；④移液器吸液後嚴禁倒置、平放，以免溶液流入內腔，損壞活塞；⑤移液器不用時應存放在專用的支架上，不得任意放置；⑥長時間不用或剛取出的新移液器應輕輕用手推動按鈕上下按壓幾次，再進行正常使用；⑦注意正確讀數，目前有的移液器是電子顯示，一般難以出錯，但對於手動調節的應特別注意。吸取液體時只能輕按第一擋，排出液體時需要按到第二擋；吸取液體時不可快速吸取。（二）水純化裝置分子生物學實驗對用水質量要求極高，器皿需經酸泡和自來水洗凈後用雙蒸水漂洗數次，配制各種溶液更是要求用三蒸水或超純水。水純化裝置主要包括：單蒸器、石英玻璃雙蒸餾器、離子交換器及超純水裝置等。（三）離心機離心機是分子生物學實驗中最常用的一類儀器，主要用於收集和分離細胞、細胞器和生物大分子等。實驗用離心機可按其轉速分為低速離心機（普通離心機）、高速離心機和超速離心機三種類型。
在分子生物學實驗中應用最多的是臺式高速離心機，一般分為常溫和冷凍兩種，最大轉速一般在12000～20000g，這類儀器特別適合於生物大分子在Eppendorf管內微量操作後的處理，最少可供0.05ml樣品的離心。
（四）電泳裝置
電泳裝置由電泳儀和電泳槽兩部分組成。它主要用於檢測、鑒定各種生物大分子的純度、含量及描述它們的特征，此外它還是分離、純化、回收和濃縮樣品的主要工具。
1.電泳儀它是作為電泳時的外加電源設備，將220V交流電整流後通過穩壓器，它既能輸出穩定的電流，又能輸出穩定的電壓，起到在被分離樣品兩端加外接電場的作用。常見的電泳儀有常壓電泳儀（輸出電壓為0～500V，電流0～150mA）、中壓電泳儀（輸出電壓400～1000V）、高壓電泳儀（輸出電壓高於lkV），另外還有一些特殊的電泳儀，如毛細管電泳儀、脈衝電場凝膠電泳儀、轉移電泳儀等。
2.電泳槽電泳槽是電泳的主要部件，是樣品分離的場所。槽內裝有電極、緩衝液槽、電泳支持架等，有的還有散熱裝置如循環水等。電泳槽種類很多，有平臥式、垂直板式、圓柱式、立板式、懸掛式等。
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