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目次
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商品簡介
本書較全面、系統地介紹了細胞工程的基本原理、基本技術及其應用以及學科研究的最新成果。全書共分3篇。第1篇為細胞工程基礎，主要概括介紹了細胞工程的發展和應用、基本設備及其使用和無菌技術等；第2篇為植物細胞工程，主要包括植物的快速繁殖與脫病毒、胚胎和胚乳培養、胚珠和子房培養與離體受精、花粉和花藥培養、植物細胞培養以及次生物質生產、原生質體培養與體細胞雜交和植物種質的超低溫保存技術等；第3篇為動物細胞工程，主要包括動物細胞培養的基本技術、細胞融合與雜交瘤技術、細胞重組與動物克隆以及干細胞技術等。
本書可用作綜合院校、師范院校以及農林院校細胞工程課程的教材，也可供其他院校有關專業的相關課程選用或參考。
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名人/編輯推薦
《普通高等教育"十一五"國家級規劃教材:細胞工程(第2版)》可用作綜合院校、師范院校以及農林院校細胞工程課程的教材，也可供其他院校有關專業的相關課程選用或參考。
目次
第1篇細胞工程基礎
第1章緒論1
1?1細胞工程的定義和基本內容1
1?2細胞工程中的基本技術2
1?2?1細胞培養技術2
1?2?2細胞融合技術3
1?2?3其他技術3
1?3細胞工程發展簡史3
1?3?1植物細胞工程的發展3
1?3?2動物細胞工程的發展4
1?4細胞工程的主要應用5
1?4?1植物細胞工程的應用5
1?4?2動物細胞工程的應用6
思考題7
第2章細胞工程中的常用設備8 第1篇細胞工程基礎
第1章緒論1
1?1細胞工程的定義和基本內容1
1?2細胞工程中的基本技術2
1?2?1細胞培養技術2
1?2?2細胞融合技術3
1?2?3其他技術3
1?3細胞工程發展簡史3
1?3?1植物細胞工程的發展3
1?3?2動物細胞工程的發展4
1?4細胞工程的主要應用5
1?4?1植物細胞工程的應用5
1?4?2動物細胞工程的應用6
思考題7
第2章細胞工程中的常用設備8
2?1細胞工程實驗室常用部分儀器設備8
2?1?1水純化裝置8
2?1?2超聲波清洗器8
2?1?3蒸汽壓力滅菌器9
2?1?4干熱滅菌設備10
2?1?5過濾除菌裝置10
2?1?6超凈工作臺12
2?1?7培養箱12
2?1?8搖床13
2?1?9移液器13
2?1?10顯微鏡14
2?1?11顯微操作儀14
2?1?12冷凍存儲設備15
2?1?13血球計數板15
2?2常用器皿16
2?2?1培養器皿16
2?2?2金屬器械17
2?3常用培養用品的清洗17
2?3?1玻璃器皿的清洗17
2?3?2橡膠制品的清洗17
2?3?3除菌濾器的清洗18
2?3?4塑料器皿的清洗18
2?3?5金屬器械的清洗18
2?3?6其他18
2?3?7常用洗滌液的種類和配制18
思考題19
第3章無菌技術20
3?1常用滅菌方法及原理20
3?1?1熱力滅菌20
3?1?2電離輻射滅菌22
3?1?3紫外線殺菌23
3?1?4過濾除菌23
3?1?5化學殺菌23
3?2無菌操作注意事項24
3?2?1無菌操作室的消毒24
3?2?2常見污染原因和預防措施25
3?3實驗室生物安全26
思考題27第2篇植物細胞工程
第4章植物細胞工程的基本原理和
技術基礎28
4?1植物細胞工程的基本原理28
4?1?1植物細胞的全能性28
4?1?2植物激素的調控作用28
4?2植物細胞和組織培養所需的營養和
環境條件29
4?2?1培養基的組成和配制29
4?2?2影響植物組織培養的環境條件32
4?3外植體的選擇及消毒33
4?3?1外植體的選擇33
4?3?2植物材料的消毒34
4?4外植體的切取和培養36
4?4?1外植體的切取36
4?4?2外植體的接種和培養36
思考題37
第5章植物離體快速繁殖和脫病毒
技術38
5?1植物的快速繁殖技術38
5?1?1快速繁殖的一般技術38
5?1?2無糖組織培養技術42
5?1?3快速繁殖中應注意的問題45
5?1?4快繁實例：月季快繁47
5?2植物工廠化育苗47
5?2?1工廠化育苗的概念和基本特點47
5?2?2工廠化育苗的一般程序48
5?2?3工廠化育苗的主要設施48
5?2?4操作實例:葡萄試管苗的快速
繁殖及工廠化育苗49
5?3無病毒植物的培養50
5?3?1脫除植物病毒的方法50
5?3?2脫病毒植株的鑒定54
5?3?3操作實例：葡萄脫毒及無毒苗
試管繁殖技術55
思考題56
第6章植物的胚胎培養和離體受精57
6?1植物的胚胎培養57
6?1?1成熟胚的培養57
6?1?2幼胚的培養58
6?1?3植物胚胎培養的應用61
6?2胚珠和子房培養62
6?2?1胚珠培養62
6?2?2子房培養63
6?2?3未傳粉子房和胚珠培養產生單
倍體64
6?3離體授粉65
6?3?1離體授粉技術的基本過程65
6?3?2影響離體授粉成功的因素66
6?3?3離體授粉技術在雜交育種上的
應用67
6?3?4操作實例：小麥雌蕊的離體
授粉67
6?4離體受精68
6?4?1雌雄配子分離68
6?4?2誘導融合69
6?4?3合子培養70
6?5胚乳培養71
6?5?1胚乳培養的基本過程72
6?5?2影響胚乳培養的主要因素73
6?5?3操作實例：大麥的胚乳培養75
思考題76
第7章花藥和花粉培養77
7?1花藥培養77
7?1?1材料的選擇77
7?1?2預處理78
7?1?3培養基78
7?1?4培養方式80
7?1?5培養條件80
7?1?6花粉植株的倍性及染色體加倍81
7?2花粉培養82
7?2?1材料的選擇和預處理82
7?2?2花粉的分離83
7?2?3花粉培養方法83
7?3花藥和花粉培養中的白化苗問題84
7?3?1白化苗產生的原因84
7?3?2植物白化苗研究存在的問題與
展望87
7?4操作實例88
7?4?1煙草花藥培養88
7?4?2煙草花粉培養88
思考題88
第8章植物的細胞培養及次生物質
生產89
8?1植物的單細胞培養89
8?1?1單細胞的分離89
8?1?2單細胞培養技術90
8?2植物細胞的懸浮培養93
8?2?1細胞懸浮培養的一般過程93
8?2?2懸浮培養工藝94
8?3植物細胞的大規模培養和次生物質
生產95
8?3?1細胞株的篩選97
8?3?2培養基的選擇97
8?3?3培養條件的選擇99
8?3?4生物反應器的選擇99
8?3?5產物的分離純化104
8?3?6操作實例：伊貝母細胞培養及
生物堿含量測定105
思考題106
第9章原生質體培養和體細胞雜交107
9?1原生質體的分離與純化107
9?1?1原生質體的分離107
9?1?2原生質體的純化與活力測定109
9?2原生質體培養111
9?2?1培養基111
9?2?2培養方法111
9?2?3原生質體的再生培養113
9?2?4操作實例：三葉半夏的原生質體
培養114
9?3體細胞雜交115
9?3?1原生質體的選擇115
9?3?2原生質體誘導融合的方法116
9?3?3雜種細胞的選擇118
9?3?4體細胞雜種的鑒定119
9?3?5體細胞雜種的遺傳特征120
思考題120
第10章植物種質的超低溫保存121
10?1抑制外植體生長的離體保存方法121
10?1?1降低溫度122
10?1?2降低環境中的氧含量122
10?1?3使用生長抑制物質122
10?1?4其他方法122
10?2離體植物材料的超低溫冰凍保存
技術123
10?2?1超低溫保存原理及基本程序123
10?2?2材料的選擇123
10?2?3材料的預處理123
10?2?4冰凍保護劑預處理124
10?2?5降溫冰凍操作124
10?2?6化凍操作127
10?2?7化凍材料的活力檢測128
10?2?8超低溫種質保存實例128
思考題129第3篇動物細胞工程
第11章動物細胞培養所需的基本
條件130
11?1動物細胞培養基的組成和制備130
11?1?1水和平衡鹽溶液130
11?1?2天然培養基131
11?1?3合成培養基133
11?1?4無血清培養基135
11?2影響動物細胞培養的環境因素138
11?2?1溫度138
11?2?2pH138
11?2?3氧氣和二氧化碳139
11?2?4滲透壓139
思考題139
第12章動物細胞培養技術140
12?1原代培養140
12?1?1取材140
12?1?2分離細胞141
12?1?3原代培養常用方法145
12?2傳代培養146
12?2?1貼壁生長細胞傳代146
12?2?2半懸浮生長細胞傳代146
12?2?3懸浮生長細胞傳代146
12?3細胞系與細胞克隆147
12?3?1細胞系(株)的建立147
12?3?2細胞克隆技術147
12?3?3克隆的分離149
12?4動物細胞的大規模離體培養技術150
12?4?1氣升式培養系統151
12?4?2微載體培養系統151
12?4?3中空纖維培養系統152
12?4?4微囊培養系統154
12?4?5旋轉式細胞培養系統154
12?4?6大規模動物細胞培養技術的
應用和存在的問題155
12?5動物細胞的超低溫保存技術155
12?5?1冷凍保護劑156
12?5?2常規冷凍方法156
12?5?3玻璃化凍存方法156
思考題157
第13章動物細胞融合和雜交瘤
技術158
13?1動物細胞融合技術158
13?1?1誘導細胞融合的方法158
13?1?2融合細胞的篩選161
13?1?3雜交細胞的遺傳表型162
13?2雜交瘤技術與單克隆抗體生產162
13?2?1親本選擇163
13?2?2細胞融合164
13?2?3雜交細胞的篩選164
13?2?4雜交瘤細胞的克隆培養165
13?2?5單克隆抗體的生產165
思考題166
第14章細胞重組及動物克隆技術167
14?1細胞重組技術168
14?1?1細胞重組的方式168
14?1?2細胞重組原料的制備168
14?2細胞核移植和動物克隆技術170
14?2?1核移植技術的一般操作程序170
14?2?2胚胎細胞核移植172
14?2?3體細胞克隆173
14?2?4異種克隆174
14?3動物克隆技術的意義及展望174
14?3?1促進生物學基礎問題的研究175
14?3?2加速良種繁育，保護瀕危
動物175
14?3?3培育轉基因克隆動物，生產
生物藥物176
14?3?4與基因和干細胞技術結合，
開展治療性克隆176
14?3?5動物克隆技術中存在的問題177
思考題178
第15章干細胞技術179
15?1干細胞概述179
15?1?1干細胞研究的發展179
15?1?2干細胞的定義和分類180
15?1?3干細胞的生物學特點181
15?2細胞分離純化常用技術184
15?2?1利用細胞體積和密度進行分離
純化184
15?2?2選擇性細胞凝集185
15?2?3基于不同黏附特性的細胞分離
方法185
15?2?4利用細胞表面標志分離純化細胞
的方法185
15?3胚胎干細胞187
15?3?1胚胎干細胞的分離187
15?3?2胚胎干細胞的培養187
15?3?3胚胎干細胞的鑒定189
15?3?4胚胎干細胞的誘導分化189
15?3?5胚胎干細胞的應用前景及存在
問題190
15?4成體干細胞192
15?4?1間充質干細胞193
15?4?2造血干細胞194
15?4?3成體干細胞的應用前景和存在
問題197
15?5誘導性多潛能干細胞199
15?5?1iPS細胞的建立200
15?5?2iPS技術的改進201
15?5?3iPS細胞的應用前景和尚待
解決的問題204
思考題206
附錄207
附錄1植物組織細胞培養基207
附錄2一些植物生長物質及其主要
性質213
附錄3動物細胞培養基214
附錄4無血清培養液的添加成分219
附錄5一些常用有機物的性質220
附錄5?1一些碳水化合物及其主要
性質220
附錄5?2一些維生素及其主要性質221
附錄5?3一些氨基酸及其主要性質221
參考文獻223
第1章緒論1
1?1細胞工程的定義和基本內容1
1?2細胞工程中的基本技術2
1?2?1細胞培養技術2
1?2?2細胞融合技術3
1?2?3其他技術3
1?3細胞工程發展簡史3
1?3?1植物細胞工程的發展3
1?3?2動物細胞工程的發展4
1?4細胞工程的主要應用5
1?4?1植物細胞工程的應用5
1?4?2動物細胞工程的應用6
思考題7
第2章細胞工程中的常用設備8 第1篇細胞工程基礎
第1章緒論1
1?1細胞工程的定義和基本內容1
1?2細胞工程中的基本技術2
1?2?1細胞培養技術2
1?2?2細胞融合技術3
1?2?3其他技術3
1?3細胞工程發展簡史3
1?3?1植物細胞工程的發展3
1?3?2動物細胞工程的發展4
1?4細胞工程的主要應用5
1?4?1植物細胞工程的應用5
1?4?2動物細胞工程的應用6
思考題7
第2章細胞工程中的常用設備8
2?1細胞工程實驗室常用部分儀器設備8
2?1?1水純化裝置8
2?1?2超聲波清洗器8
2?1?3蒸汽壓力滅菌器9
2?1?4干熱滅菌設備10
2?1?5過濾除菌裝置10
2?1?6超凈工作臺12
2?1?7培養箱12
2?1?8搖床13
2?1?9移液器13
2?1?10顯微鏡14
2?1?11顯微操作儀14
2?1?12冷凍存儲設備15
2?1?13血球計數板15
2?2常用器皿16
2?2?1培養器皿16
2?2?2金屬器械17
2?3常用培養用品的清洗17
2?3?1玻璃器皿的清洗17
2?3?2橡膠制品的清洗17
2?3?3除菌濾器的清洗18
2?3?4塑料器皿的清洗18
2?3?5金屬器械的清洗18
2?3?6其他18
2?3?7常用洗滌液的種類和配制18
思考題19
第3章無菌技術20
3?1常用滅菌方法及原理20
3?1?1熱力滅菌20
3?1?2電離輻射滅菌22
3?1?3紫外線殺菌23
3?1?4過濾除菌23
3?1?5化學殺菌23
3?2無菌操作注意事項24
3?2?1無菌操作室的消毒24
3?2?2常見污染原因和預防措施25
3?3實驗室生物安全26
思考題27第2篇植物細胞工程
第4章植物細胞工程的基本原理和
技術基礎28
4?1植物細胞工程的基本原理28
4?1?1植物細胞的全能性28
4?1?2植物激素的調控作用28
4?2植物細胞和組織培養所需的營養和
環境條件29
4?2?1培養基的組成和配制29
4?2?2影響植物組織培養的環境條件32
4?3外植體的選擇及消毒33
4?3?1外植體的選擇33
4?3?2植物材料的消毒34
4?4外植體的切取和培養36
4?4?1外植體的切取36
4?4?2外植體的接種和培養36
思考題37
第5章植物離體快速繁殖和脫病毒
技術38
5?1植物的快速繁殖技術38
5?1?1快速繁殖的一般技術38
5?1?2無糖組織培養技術42
5?1?3快速繁殖中應注意的問題45
5?1?4快繁實例：月季快繁47
5?2植物工廠化育苗47
5?2?1工廠化育苗的概念和基本特點47
5?2?2工廠化育苗的一般程序48
5?2?3工廠化育苗的主要設施48
5?2?4操作實例:葡萄試管苗的快速
繁殖及工廠化育苗49
5?3無病毒植物的培養50
5?3?1脫除植物病毒的方法50
5?3?2脫病毒植株的鑒定54
5?3?3操作實例：葡萄脫毒及無毒苗
試管繁殖技術55
思考題56
第6章植物的胚胎培養和離體受精57
6?1植物的胚胎培養57
6?1?1成熟胚的培養57
6?1?2幼胚的培養58
6?1?3植物胚胎培養的應用61
6?2胚珠和子房培養62
6?2?1胚珠培養62
6?2?2子房培養63
6?2?3未傳粉子房和胚珠培養產生單
倍體64
6?3離體授粉65
6?3?1離體授粉技術的基本過程65
6?3?2影響離體授粉成功的因素66
6?3?3離體授粉技術在雜交育種上的
應用67
6?3?4操作實例：小麥雌蕊的離體
授粉67
6?4離體受精68
6?4?1雌雄配子分離68
6?4?2誘導融合69
6?4?3合子培養70
6?5胚乳培養71
6?5?1胚乳培養的基本過程72
6?5?2影響胚乳培養的主要因素73
6?5?3操作實例：大麥的胚乳培養75
思考題76
第7章花藥和花粉培養77
7?1花藥培養77
7?1?1材料的選擇77
7?1?2預處理78
7?1?3培養基78
7?1?4培養方式80
7?1?5培養條件80
7?1?6花粉植株的倍性及染色體加倍81
7?2花粉培養82
7?2?1材料的選擇和預處理82
7?2?2花粉的分離83
7?2?3花粉培養方法83
7?3花藥和花粉培養中的白化苗問題84
7?3?1白化苗產生的原因84
7?3?2植物白化苗研究存在的問題與
展望87
7?4操作實例88
7?4?1煙草花藥培養88
7?4?2煙草花粉培養88
思考題88
第8章植物的細胞培養及次生物質
生產89
8?1植物的單細胞培養89
8?1?1單細胞的分離89
8?1?2單細胞培養技術90
8?2植物細胞的懸浮培養93
8?2?1細胞懸浮培養的一般過程93
8?2?2懸浮培養工藝94
8?3植物細胞的大規模培養和次生物質
生產95
8?3?1細胞株的篩選97
8?3?2培養基的選擇97
8?3?3培養條件的選擇99
8?3?4生物反應器的選擇99
8?3?5產物的分離純化104
8?3?6操作實例：伊貝母細胞培養及
生物堿含量測定105
思考題106
第9章原生質體培養和體細胞雜交107
9?1原生質體的分離與純化107
9?1?1原生質體的分離107
9?1?2原生質體的純化與活力測定109
9?2原生質體培養111
9?2?1培養基111
9?2?2培養方法111
9?2?3原生質體的再生培養113
9?2?4操作實例：三葉半夏的原生質體
培養114
9?3體細胞雜交115
9?3?1原生質體的選擇115
9?3?2原生質體誘導融合的方法116
9?3?3雜種細胞的選擇118
9?3?4體細胞雜種的鑒定119
9?3?5體細胞雜種的遺傳特征120
思考題120
第10章植物種質的超低溫保存121
10?1抑制外植體生長的離體保存方法121
10?1?1降低溫度122
10?1?2降低環境中的氧含量122
10?1?3使用生長抑制物質122
10?1?4其他方法122
10?2離體植物材料的超低溫冰凍保存
技術123
10?2?1超低溫保存原理及基本程序123
10?2?2材料的選擇123
10?2?3材料的預處理123
10?2?4冰凍保護劑預處理124
10?2?5降溫冰凍操作124
10?2?6化凍操作127
10?2?7化凍材料的活力檢測128
10?2?8超低溫種質保存實例128
思考題129第3篇動物細胞工程
第11章動物細胞培養所需的基本
條件130
11?1動物細胞培養基的組成和制備130
11?1?1水和平衡鹽溶液130
11?1?2天然培養基131
11?1?3合成培養基133
11?1?4無血清培養基135
11?2影響動物細胞培養的環境因素138
11?2?1溫度138
11?2?2pH138
11?2?3氧氣和二氧化碳139
11?2?4滲透壓139
思考題139
第12章動物細胞培養技術140
12?1原代培養140
12?1?1取材140
12?1?2分離細胞141
12?1?3原代培養常用方法145
12?2傳代培養146
12?2?1貼壁生長細胞傳代146
12?2?2半懸浮生長細胞傳代146
12?2?3懸浮生長細胞傳代146
12?3細胞系與細胞克隆147
12?3?1細胞系(株)的建立147
12?3?2細胞克隆技術147
12?3?3克隆的分離149
12?4動物細胞的大規模離體培養技術150
12?4?1氣升式培養系統151
12?4?2微載體培養系統151
12?4?3中空纖維培養系統152
12?4?4微囊培養系統154
12?4?5旋轉式細胞培養系統154
12?4?6大規模動物細胞培養技術的
應用和存在的問題155
12?5動物細胞的超低溫保存技術155
12?5?1冷凍保護劑156
12?5?2常規冷凍方法156
12?5?3玻璃化凍存方法156
思考題157
第13章動物細胞融合和雜交瘤
技術158
13?1動物細胞融合技術158
13?1?1誘導細胞融合的方法158
13?1?2融合細胞的篩選161
13?1?3雜交細胞的遺傳表型162
13?2雜交瘤技術與單克隆抗體生產162
13?2?1親本選擇163
13?2?2細胞融合164
13?2?3雜交細胞的篩選164
13?2?4雜交瘤細胞的克隆培養165
13?2?5單克隆抗體的生產165
思考題166
第14章細胞重組及動物克隆技術167
14?1細胞重組技術168
14?1?1細胞重組的方式168
14?1?2細胞重組原料的制備168
14?2細胞核移植和動物克隆技術170
14?2?1核移植技術的一般操作程序170
14?2?2胚胎細胞核移植172
14?2?3體細胞克隆173
14?2?4異種克隆174
14?3動物克隆技術的意義及展望174
14?3?1促進生物學基礎問題的研究175
14?3?2加速良種繁育，保護瀕危
動物175
14?3?3培育轉基因克隆動物，生產
生物藥物176
14?3?4與基因和干細胞技術結合，
開展治療性克隆176
14?3?5動物克隆技術中存在的問題177
思考題178
第15章干細胞技術179
15?1干細胞概述179
15?1?1干細胞研究的發展179
15?1?2干細胞的定義和分類180
15?1?3干細胞的生物學特點181
15?2細胞分離純化常用技術184
15?2?1利用細胞體積和密度進行分離
純化184
15?2?2選擇性細胞凝集185
15?2?3基于不同黏附特性的細胞分離
方法185
15?2?4利用細胞表面標志分離純化細胞
的方法185
15?3胚胎干細胞187
15?3?1胚胎干細胞的分離187
15?3?2胚胎干細胞的培養187
15?3?3胚胎干細胞的鑒定189
15?3?4胚胎干細胞的誘導分化189
15?3?5胚胎干細胞的應用前景及存在
問題190
15?4成體干細胞192
15?4?1間充質干細胞193
15?4?2造血干細胞194
15?4?3成體干細胞的應用前景和存在
問題197
15?5誘導性多潛能干細胞199
15?5?1iPS細胞的建立200
15?5?2iPS技術的改進201
15?5?3iPS細胞的應用前景和尚待
解決的問題204
思考題206
附錄207
附錄1植物組織細胞培養基207
附錄2一些植物生長物質及其主要
性質213
附錄3動物細胞培養基214
附錄4無血清培養液的添加成分219
附錄5一些常用有機物的性質220
附錄5?1一些碳水化合物及其主要
性質220
附錄5?2一些維生素及其主要性質221
附錄5?3一些氨基酸及其主要性質221
參考文獻223
書摘/試閱
8.2植物細胞的懸浮培養
植物細胞的懸浮培養是將植物細胞和小的細胞團懸浮于液體培養基中，在保持細胞良好分散狀態下進行培養的技術。和固體培養相比，液體培養增加了細胞與培養液的接觸面，改善了營養供應；可以避免有害代謝物在局部濃度過高；有利氧的充分供應。因此細胞生長和增殖速度快，能大量提供分散性好且比較均勻的細胞，既有利于在細胞水平上進行各種遺傳操作和生理生化等方面的研究，也適于植物細胞的工業化大規模培養及生產有價值的細胞代謝產物。
8.2.1 細胞懸浮培養的一般過程
通過植物細胞懸浮培養獲得再生植株的程序一般包括以下幾個環節。
8.2.1.1疏松易碎愈傷組織的誘導
目前建立懸浮細胞培養體系時，一般采用愈傷組織作為起始細胞來源。首先應選擇合適的外植體，這對于以后進行的疏松愈傷組織誘導和懸浮細胞系的建立都很重要。對于不同植物，外植體的選擇差異較大。雙子葉植物中，常用的外植體為胚、下胚軸、子葉、葉片、根等；在單子葉植物中為胚、幼穗、花藥等。無論單子葉植物還是雙子葉植物，幼胚一般是最佳材料，誘導的愈傷組織質量好、增殖速度快、分化與再生植株的能力強。
要獲得疏松易碎、增殖和再生能力強的愈傷組織，除外植體外，基本培養基和天然附加物以及植物生長物質的種類、濃度和比例等都很重要。例如，2，4—D常作為起始培養基的生長素，且使用濃度較高，配合一定濃度的細胞分裂素也是必要的。但由于植物種類、器官和組織存在差異，具體濃度應通過預實驗確定。添加有機附加物如CH、L—脯氨酸和谷氨酰胺等對誘導疏松愈傷組織有利。培養基中蔗糖濃度較低時（10～30g／L），一般有利于疏松易碎愈傷組織的形成。
多數情況下，疏松易碎的愈傷組織不容易直接由外植體誘導獲得，而是在愈傷組織繼代培養過程中通過篩選得到的。培養中需要不斷選擇那些松散性和細胞狀態都良好的愈傷組織反復進行繼代培養，以獲得大量均勻一致、疏松易碎、適合于建立懸浮細胞系的愈傷組織。
8.2.1.2單細胞分離和細胞懸浮培養
單細胞的分離過程參見8.1.1。
在懸浮培養細胞時，接種的細胞密度和單細胞的平板培養一樣不能低于某一臨界值，否則就不能很好地進行細胞分裂。一般應調整細胞起始密度在104～105個／mL范圍，在最適條件下振蕩培養。
8.2.1.3愈傷組織形成和植株再生
懸浮細胞可以通過直接形成體細胞胚（如胡蘿卜），或者先形成愈傷組織，再進一步分化成再生植株（水稻等）。
8.2.1.4操作實例：水稻細胞的懸浮培養
（1）愈傷組織誘導 水稻種子去皮后先用70％酒精表面消毒2min，再用2.5％～3％的次氯酸鈉浸泡并輕搖30min，無菌蒸餾水沖洗3次。
