生物化學與分子生物學實驗(第2版)（簡體書）

《高等醫藥院校基礎醫學實驗教學系列教材：生物化學與分子生物學實驗（第2版）》分為基本實驗操作及常用儀器使用、經典驗證性實驗、綜合性實驗和創新性實驗共四篇。在基礎理論知識方面，對生物化學與分子生物學的經典研究技術、基本實驗操作和常用儀器使用均進行了詳細介紹。在實驗項目設置上，包括蛋白質定量、層析、電泳、酶學、糖類與脂類、核酸分離純化、PCR、分子克隆、分子雜交以及RNA干擾、雙向電泳、EMSA和ChIP等經典驗證性實驗、綜合性實驗和創新性實驗。教材內容新穎，體系完整，有所側重，便於選擇。《高等醫藥院校基礎醫學實驗教學系列教材：生物化學與分子生物學實驗（第2版）》可供醫學院校臨床醫學等各專業五年制、七年制和研究生學生使用，也可供相關專業的科研、教學和技術人員參考。

《高等醫藥院校基礎醫學實驗教學系列教材:生物化學與分子生物學實驗(第2版)》可供醫學院校臨床醫學等各專業五年制、七年制和研究生學生使用，也可供相關專業的科研、教學和技術人員參考。

第一篇基本實驗操作及常用儀器使用第1章生物化學常用研究技術第2章分子生物學常用研究技術第3章基本實驗操作第4章常用儀器使用第5章實驗室規則及安全防護第6章如何撰寫實驗報告第二篇經典驗證性實驗第1章蛋白質定量實驗實驗一雙縮脲法測定血清蛋白質含量實驗二Folin-酚試劑法測定蛋白質含量實驗三紫外分光光度法測定蛋白質含量實驗四考馬斯亮藍結合法測定蛋白質含量實驗五BCA法測定蛋白質含量第2章層析實驗實驗六紙層析法觀察轉氨基作用實驗七葡聚糖凝膠柱層析分離血紅蛋白與魚精蛋白實驗八離子交換層析分離混合氨基酸實驗九薄層層析分離鑒定氨基酸第3章電泳實驗實驗十血清醋酸纖維薄膜電泳實驗十一聚丙烯醯胺凝膠電泳分離血清LDH同工酶實驗十二SDS-PAGE測定蛋白質的分子量第4章酶學實驗實驗十三血清鹼性磷酸酶活性測定實驗十四血清丙氨酸氨基轉移酶活性測定實驗十五影響胰蛋白酶作用的因素實驗十六丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用實驗十七酶的非競爭性抑制作用實驗十八酶米氏常數的測定第5章糖類與脂類實驗十九血糖濃度的測定實驗二十腎上腺素對血糖濃度的影響實驗二十一血清甘油三酯濃度測定實驗二十二血清總膽固醇濃度測定實驗二十三血清載脂蛋白apoAl的測定第6章核酸分離純化技術實驗二十四基因組DNA的提取製備與檢測實驗二十五全血基因組DNA的試劑盒法提取製備與檢測實驗二十六總RNA的提取製備與檢測實驗二十七質粒DNA的提取製備與檢測實驗二十八動物組織核酸的提取及成分鑒定第7章PCR技術實驗二十九常規PCR技術實驗三十定量PCR技術第8章分子克隆技術實驗三十一DNA的限制性酶切與電泳檢測實驗三十二凝膠中DNA片斷的純化回收實驗三十三DNA連接實驗實驗三十四感受態細胞的製備實驗三十五重組DNA轉化與藍白斑篩選第9章分子雜交技術實驗三十六Southern印跡雜交實驗三十七Northern印跡雜交實驗三十八Western印跡實驗三十九核酸原位雜交附核酸分子探針的標記第三篇綜合性實驗實驗一血清γ球蛋白的分離純化與鑒定實驗二鹼性磷酸酶的分離純化與動力學研究實驗三β肌動蛋白基因的克隆實驗四hCS在大腸埃希菌中的表達、純化與鑒定實驗五hCS基因在畢赤酵母中的表達及鑒定實驗六熒光原位雜交實驗實驗七雙脫氧鏈末端合成終止法測定DNA序列實驗八肽或蛋白質N-端氨基酸序列測定實驗九用雙熒光素酶報告基因檢測啟動子活性實驗十電泳遷移阻滯實驗實驗十一染色質免疫沉澱實驗十二蛋白質雙向電泳實驗十三酵母雙雜交實驗實驗十四RNA干擾實驗第四篇創新性實驗實驗一重要蛋白質或酶的分離純化實驗二糖尿病的生化及遺傳檢測分析實驗實驗三家族性高膽固醇血症的診斷實驗四血友病的分子診斷實驗五RNA干擾技術靶向沉默目的基因

三、分子雜交技術
分子雜交技術是目前生物醫學研究中最為常用的基本分子生物學技術之一。分子雜交技術最早可追溯至20世紀60年代Hall和Bolton等人的開拓性工作，但直到20世紀70年代，隨著限制性內切酶、核酸自動合成的發展和應用，一系列成熟的分子雜交技術才得以建立完善和廣泛應用。
分子雜交技術可按作用環境大致分為液相雜交和固相雜交兩種類型。液相雜交所參加反應的兩條核酸鏈都游離在溶液中，是一種最早建立的雜交類型，其主要缺點是雜交后過量的未雜交探針在溶液中除去較為困難，同時誤差較高且操作繁瑣復雜，因此其應用較少。固相雜交是將參加反應的核酸等分子首先固定在硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板等固體支持物上，然后再進行雜交反應，也稱為膜上印跡雜交。固相雜交后，未雜交的游離探針片段可容易地漂洗除去，同時還具有操作簡便、重復性好等優點，故該法最為常用。固相雜交技術按照操作方法不同可分為：原位雜交、印跡雜交、斑點雜交和反向雜交等。其中原位雜交包括有菌落原位雜交和組織原位雜交等方法，印跡雜交則包括有Southern印跡雜交、Northern印跡雜交和Western印跡雜交等方法。
菌落原位雜交是將細菌從培養平板轉移到硝酸纖維素濾膜上，然后將濾膜上的菌落裂菌以釋出DNA。將DNA烘干固定于膜上與32P標記的探針雜交，放射自顯影檢測菌落雜交信號，并與平板上的菌落對位。
組織原位雜交簡稱原位雜交，指組織或細胞的原位雜交，它與菌落的原位雜交不同。菌落原位雜交需裂解細菌釋出DNA，然后進行雜交。而組織原位雜交是經適當處理后，使細胞通透性增加，讓探針進入細胞內與DNA或RNA雜交。因此組織原位雜交可以確定探針的互補序列在胞內的空間位置，這一點具有重要的生物學和病理學意義。例如，對致密染色體DNA的原位雜交可用于顯示特定的序列的位置；對分裂期間核DNA的雜交可研究特定序列在染色質內的功能排布；與細胞RNA的雜交可精確分析任何一種RNA在細胞中和組織中的分布。此外，原位雜交還是顯示細胞亞群分布和動向及病原微生物存在方式和部位的一種重要技術。
Southern印跡雜交技術是由E.M Southern于1975年建立的，故稱為Southern雜交。其基本原理和方法是將DNA標本用限制性內切酶消化后，經瓊脂糖凝膠電泳分離各酶解片段，然后變性處理后將DNA從凝膠中轉印至硝酸纖維素濾膜等固相載體上，烘干固定后與標記的核酸探針進行雜交，最后通過放射自顯影等方法顯示雜交信號，從而可以確定被檢測的DNA樣品中是否有與探針同源的片段以及該片段的長度。作為分子生物學的經典實驗方法，該項技術已經被廣泛應用于生物醫學基礎研究、遺傳病檢測、DNA指紋分析等臨床診斷工作中。
繼分析DNA的Southern雜交方法出現后，1977年Alwine等人提出一種與此相類似的、用于分析細胞RNA樣品中特定mRNA分子大小和豐度的分子雜交技術，為了與Southern雜交相對應，科學家們則將這種RNA印跡雜交方法趣稱為Northern雜交，而后來的與此原理相似的蛋白質印跡雜交方法則也相應地趣稱為Western雜交。