實用細胞培養技術（簡體書）

《實用細胞培養技術（第2版）》共分三篇13章。第一篇有3章，分別講述細胞培養的基本條件、基本技術和相關的研究方法；第二篇有4章，分別講述動物細胞、人細胞、幹細胞和腫瘤細胞的培養方法；第三篇是應用篇，共6章，分別講述了細胞培養技術在病毒學、免疫學、腫瘤學、藥理學、幹細胞、毒理學等方面的應用。《實用細胞培養技術（第2版）》始終保持實用性、可操作性和先進性的優點，其特點為：1 所述培養技術是作者多年來的經驗總結，技術成熟，方法可靠，可重複性好；2 《實用細胞培養技術（第2版）》較詳盡地介紹了各種細胞的製備與培養，可滿足基礎研究及臨床應用的需求；③培養方法與實驗設計密切配合，與臨床應用相適應，能解決診斷、預防和治療上的各種實際問題；④實驗方法先進，反映了研究與應用的最新進展等。《實用細胞培養技術（第2版）》既是學習細胞培養技術的理論教材，又是一本實驗技術手冊。是從事細胞學、病毒學、免疫學、藥理學、毒理學、遺傳學、臨床醫學等工作的人員，以及從事組織和細胞工程技術研究、生產和管理人員的重要工具書。既可作為醫學和生物技術等專業本科生和研究生的教材，又可作為從事生物學、生物材料學及臨床醫學科研人員的參考書。

《實用細胞培養技術(第2版)》既是學習細胞培養技術的理論教材，又是一本實驗技術手冊。是從事細胞學、病毒學、免疫學、藥理學、毒理學、遺傳學、臨床醫學等工作的人員，以及從事組織和細胞工程技術研究、生產和管理人員的重要工具書。既可作為醫學和生物技術等專業本科生和研究生的教材，又可作為從事生物學、生物材料學及臨床醫學科研人員的參考書。

緒論第一篇細胞培養的基礎第一章細胞培養的基本條件第一節細胞培養實驗室的建立第二節細胞培養用液第二章細胞培養的基本技術第一節無菌技術第二節標本材料的選擇和處理第三節細胞培養類型及培養技術第四節細胞形態學檢查法第五節細胞培養污染的檢測、排除第六節細胞的凍存、復蘇與運輸第三章培養細胞研究及檢測技術第一節細胞週期分析方法第二節細胞同步化方法第三節細胞融合第四節細胞克隆技術第五節培養細胞的轉化第六節細胞凋亡第七節培養細胞基因導人技術第八節細胞酶活性測定第九節流式細胞分選術第二篇細胞培養技術第四章動物細胞培養第一節雉科動物細胞培養第二節鼠科動物細胞培養第三節兔科動物細胞培養第四節犬科與豬科動物細胞培養第五章人細胞培養第一節人胚細胞的製備與培養第二節人內皮細胞的製備與培養第三節人結締組織細胞培養第四節人骨細胞培養第五節人肌細胞的培養第六節人肺泡細胞培養第七節人乳腺上皮細胞培養第八節人胰島細胞的製備與鑒定第九節人甲狀腺細胞的製備與應用第十節入神經元的培養第六章幹細胞的培養第一節飼養層細胞與條件培養基的製備第二節幹細胞的建系第三節胚胎幹細胞的培養第四節人皮膚乾細胞的培養第五節大鼠心肌幹細胞的培養第六節人造血幹細胞的分離與培養第七節人骨髓間充質幹細胞的培養與誘導分化第八節大鼠神經幹細胞的培養第九節胰島幹細胞的培養第十節誘導性多潛能幹細胞第七章腫瘤細胞培養第一節腫瘤細胞的取材及培養第二節培養腫瘤細胞的生物學鑒定第三節影響腫瘤細胞生長實驗第四節常見腫瘤的原代細胞培養第五節常用腫瘤細胞株的培養第三篇細胞培養技術的應用第八章細胞培養在病毒學研究中的應用第一節增殖和分離鑒定病毒第二節病毒性感染的血清學診斷第三節體外抗病毒藥效試驗……附錄一實驗室常用的細胞系（株）附錄二常用人工合成細胞培養基附錄三細胞培養及相關試驗常用緩衝液附錄四等密度沉降分離時某些哺乳動物細胞在Percoll中的漂浮密度中英文對照索引

一、細胞培養污染的種類與檢測
細胞培養工作除了要有完善的實驗設計和技術方法外，預防污染是細胞培養技術中的主要問題。污染主要指混入細胞培養液中對細胞生存有損害的成分或細胞成分的不純。本節將主要介紹不同微生物的污染及其檢測。
（一）真菌污染及其檢測
在細胞培養中以真菌污染較常見，尤其在炎熱、潮濕的季節。常見的真菌污染主要有煙曲霉菌（Aspergillus fumigatus）、黑曲霉菌（Aspergillus niger）、毛霉菌（Mucor）、孢子菌（Oospora）、白假絲酵母菌（Saccharomyces albicans）、酵母菌（Yeast）等。真菌種類繁多，形態各異。雖然培養基一般不變混濁，但較易發現有真菌污染，因污染時大多在培養基表面出現肉眼可見的小點狀漂浮物，呈白色或淺黃色，有的漂浮物也呈散在生長。檢測時取漂浮物在顯微鏡下觀察，可見絲狀、管狀或樹枝狀菌絲，縱橫交錯于細胞之間。假絲酵母菌和酵母菌等單細胞真菌的污染可致培養基混濁，鏡下可見卵圓形菌體，或長出假菌絲或出芽，散在于細胞周邊或細胞之間生長。真菌生長迅速，能在短時間內抑制細胞生長或產生有毒物質殺死細胞。
（二）細菌污染及其檢測
常見的細菌污染主要有大腸埃希菌、枯草桿菌、假單胞菌、葡萄球菌等。細菌污染會出現培養基明顯變混濁，pH也多發生改變。但有的培養基污染而肉眼觀察卻無多少變化，只有用倒置顯微鏡（高倍）和相差顯微鏡觀察才知有污染，視野內可見均勻的點狀顆粒在位移，所以每天都要仔細觀察所有培養瓶。細胞培養瓶內細菌迅速增殖，可消耗培養基的營養成分，抑制細胞生長。產生毒素的細菌可導致細胞崩解死亡。經染色和顯微鏡檢查或進行細菌培養可加以確定。
（三）納米細菌污染及其檢測
隨著科學技術的深入發展和研究，人們發現了納米細菌（nanobacteria，NB）與細胞培養的相關性，學者們認為NB是細胞培養的污染原因之一，其來源可能是細胞本身的污染或從動物取材時污染造成的。牛可能是NB的自然宿主，大約8％的正常人血液中存在納米細菌抗原。NB增殖緩慢但對細胞有損害，數量達到一定程度可引起細胞死亡。NB是革蘭陰性的蛋白類細菌（proteobacteria），呈球狀或球桿狀，大小為50～500nm。NB的新陳代謝率極為緩慢，僅為普通細菌代謝率的萬分之一，平均倍增時間為3天。NB廣泛存在于自然界的礦物質中和生物體內，能感染人類和其他哺乳動物，是一種人畜共患的致病原。研究發現NB可能與腎、前列腺、膽管、膀胱、睪丸、牙髓等處的結石以及松果體和胎盤的鈣化有關。也有報道NB在動脈粥樣硬化斑塊，鈣化動脈瘤，鈣化心臟瓣膜，心臟房室間隔瓣膜贅生物等病變組織中出現，還在乳腺癌、卵巢癌和原發性肝癌組織中觀察到類似NB樣的結構顆粒。