細胞培養(附光盤)（簡體書）

《細胞培養》為國家示范性高職院校一線教師和企業專家共同開發的教改成果教材。本教材打破傳統的學科體系，以項目為載體，讓學生在完成項目的過程中學習知識，訓練技能，提升職業綜合素質。教材中的項目主要取材于企業（或行業）的真實工作任務，包括CHO細胞的培養、CHO細胞的凍存和復蘇、雞胚成纖維細胞的培養、VERO細胞的大規模培養、抗人血白蛋白雜交瘤細胞系的建立、胡蘿卜懸浮細胞系的建立。每個項目都附有與之配套的實訓音像資料。
《細胞培養》適合高職高專院校生物技術相關專業的學生使用，也可供有關技術人員參考。

由蘭蓉主編的《細胞培養(修訂版)》以普通高等教育“十一五”國家級規化教材《細胞培養技術》為基礎，融入“工學結合”的辦學思路，聘請一批企業一線專家參與教材建設，開發企業真正用得上的教學內容，充分體現項目教學、行為引導式教學、任務驅動式教學等現代教法和學法。
教材中的項目均取材于企業(或行業)的真實工作任務，包括CHO細胞的培養、CHO細胞的凍存和復蘇、雞胚成纖維細胞的培養、VERO細胞的大規模培養、抗人血白蛋白雜交瘤細胞系的建立、胡蘿卜懸浮細胞系的建立。每個項目都附有與之配套的實訓音像資料，時長約1小時，為教材使用者的自主學習提供了方便。

細胞培養技術是生物技術的重要組成部分，是生物學各研究領域的基本技術和技能，現已廣泛應用在生物學、醫學、生物制藥等各個領域。目前，全國開設生物相關專業的高等職業院校共有200多所，絕大多數學校都開設細胞培養方面的課程，但有關細胞培養技術方面的書籍或教材，大部分都不適合高職院校的基于工作過程的教學改革需求。本教材以普通高等教育“十一五”國家級規化教材《細胞培養技術》為基礎，融入“工學結合”的辦學思路，聘請一批企業一線專家參與教材建設，開發企業真正用得上的教學內容，充分體現項目教學、行為引導式教學、任務驅動式教學等現代教法和學法。
教材中的項目均取材于企業(或行業)的真實工作任務，包括CHO細胞的培養、CHO細胞的凍存和復蘇、雞胚成纖維細胞的培養、VERO細胞的大規模培養、抗人血白蛋白雜交瘤細胞系的建立、胡蘿卜懸浮細胞系的建立。每個項目都附有與之配套的實訓音像資料，時長約1小時，為教材使用者的自主學習提供了方便。
本書在編寫與出版過程中，得到化學工業出版社與北京協和醫學院的大力支持。北京協和醫學院的章靜波教授審閱了全部書稿，并對本書的構架和內容提出了許多建設性意見。北京協和醫學院細胞中心的劉玉琴教授在配套音像資料的拍攝上做了大量工作。在此，作者謹向化學工業出版社、北京協和醫學院等單位致以誠摯的感謝。
由于作者的經驗和水平有限，書中難免會有不足之處，敬請廣大讀者與同仁批評指正。
編者
2010年2月

項目一CHO細胞的培養1
項目介紹1
項目實施2
任務一CHO細胞培養前的準備2
一 培養用品的準備2
二 培養用液的配制6
任務二CHO細胞的傳代10
任務三CHO細胞培養的常規檢查11
項目思考13
項目知識鏈接13
項目必備知識13
一 動物細胞培養的概念13
二 培養細胞的生長類型和形態特征14
三 培養前的準備16
四 動物細胞傳代培養技術32
五 培養細胞的觀察和檢測技術34
項目拓展知識39
一 動物細胞培養發展史39
二 動物細胞培養的應用42
三 動物細胞培養工作的基本要求和
工作方法43
四 培養細胞分化狀態的變化44
五 培養細胞的生長特點45
六 培養細胞的生長和增殖過程47
七 培養細胞的生長條件49
八 動物細胞培養實驗室52
理論難點自測56
項目二CHO細胞的凍存和復蘇58
項目介紹58
項目實施58
任務一CHO細胞的凍存58
任務二CHO細胞的復蘇59
任務三CHO細胞的活性檢查60
一 染色法60
二 四唑鹽（MTT）比色法62
項目思考63
項目知識鏈接63
項目必備知識63
一 細胞的凍存63
二 細胞的復蘇64
三 細胞活性檢查65
四 細胞計數65
項目拓展知識66
一 細胞的運輸66
二 骨髓瘤細胞的凍存66
三 細胞凍存的注意事項67
理論難點自測67
項目三雞胚成纖維細胞的培養68
項目介紹68
項目實施68
任務一組織塊法培養雞胚成纖維細胞68
任務二消化法培養雞胚成纖維細胞70
項目思考72
項目知識鏈接72
項目必備知識72
一 組織塊培養法72
二 消化培養法74
項目拓展知識74
一 不同組織的取材74
二 組織材料的分離75
三 上皮細胞培養77
四 神經細胞培養79
五 腫瘤細胞培養80
理論難點自測84
項目四VERO細胞的大規模培養86
項目介紹86
項目實施87
項目思考88
項目知識鏈接88
項目必備知識88
一 動物細胞大規模培養技術概述88
二 動物細胞大規模培養的方法89
項目拓展知識95
一 動物細胞大規模培養技術的應用95
二 動物細胞生物反應器95
三 大規模培養技術的操作方式100
理論難點自測101
項目五抗人血白蛋白雜交瘤細胞系
的建立103
項目介紹103
項目實施104
任務一人血白蛋白免疫小鼠的準備104
任務二骨髓瘤細胞和脾細胞的融合104
一 主要試劑的配制104
二 操作過程105
任務三抗人血白蛋白雜交瘤細胞
的篩選108
一 試劑的配制108
二 可溶性抗原的?聯免疫
吸附試驗（ELISA）109
任務四抗人血白蛋白雜交瘤細胞的
克隆培養109
一 有限稀釋法109
二 軟瓊脂法110
任務五雜交瘤細胞的凍存和復蘇110
一 雜交瘤細胞的凍存110
二 雜交瘤細胞的復蘇111
項目思考111
項目知識鏈接111
項目必備知識111
一 單克隆抗體的概念111
二 雜交瘤技術制備單克隆抗體的基本
原理111
三 雜交瘤技術制備單克隆抗體的
主要過程112
項目拓展知識117
一 雜交瘤技術的誕生117
二 單克隆抗體的大量制備和純化117
三 細胞的基因轉染技術118
理論難點自測121
項目六胡蘿卜懸浮細胞系的建立122
項目介紹122
項目實施123
任務一MS培養基的制備123
一 MS培養基母液的配制和保存123
二 MS培養基的配制和滅菌124
三 配制記錄125
任務二胡蘿卜愈傷組織的誘導126
任務三胡蘿卜細胞的懸浮培養127
項目思考127
項目知識鏈接128
項目必備知識128
一 植物組織與細胞培養128
二 植物細胞培養的培養基131
三 外植體的選擇和預處理137
四 植物愈傷組織培養的一般程序139
五 植物細胞的懸浮培養139
六 植物細胞培養的環境條件141
項目拓展知識143
一 植物細胞培養的發展史143
二 植物細胞培養的應用145
三 植物細胞培養的實驗室條件147
四 植物細胞的固定化培養152
五 單細胞培養153
六 原生質體培養156
七 植物細胞的大規模培養161
理論難點自測169
附錄1常用設備標準操作規程172
一 三洋MCO15AC型二氧化碳培養箱標準操作規程172
二 SZ93的雙重純水蒸餾器標準操作規程173
三 37XB型倒置顯微鏡標準操作規程173
四 高壓滅菌鍋標準操作規程174
五 超凈工作臺標準操作規程174
六 電熱接種滅菌器標準操作規程174
七 氣浴恒溫振蕩器標準操作規程174
附錄2細胞培養技術常用術語中
英文對照175
參考文獻179