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目次
書摘/試閱
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環境安全關乎人類生存與健康，資源與環境微生 物學實驗也是高校的一門重要專業課程。楊金水主編 的這本《資源與環境微生物學實驗教程》在科學出版 社的組織和中國農業大學的支持下，由多所院校一線 教師集體編寫而成。全書以微生物在水體、土壤、大 氣、難降解化合物、環境質量監測及環境領域中的基 礎理論及實際應用方面的重要作用為主，設置了29個 實驗，注重實用性和先進性，以拓展學生對微生物學 在工、農、環保等領域應用的認識，提高綜合能力。
《資源與環境微生物學實驗教程》可作為農林院 校、綜合性大學、師范院校的生命科學相關專業、環 境科學與工程及其他相關專業的本科生和研究生教材 或教學參考書使用，也可供相關專業的教師和研究人 員參考。
《資源與環境微生物學實驗教程》可作為農林院 校、綜合性大學、師范院校的生命科學相關專業、環 境科學與工程及其他相關專業的本科生和研究生教材 或教學參考書使用，也可供相關專業的教師和研究人 員參考。
名人/編輯推薦
楊金水主編的這本《資源與環境微生物學實驗教程》針對微生物在水體、土壤、大氣、難降解化合物、環境質量監測及環境領域中的基礎理論及實際應用方面的重要作用，分別設置了水中細菌學檢測，環境水體中傷寒沙門菌的定量PCR檢測，噬菌體的分離、純化及效價測定，水中生化需氧量的測定，強化生物除磷技術，微生物脫氮技術，富營養化湖水中藻類的測定（葉綠素α法)，水體沉積物中DNA的提取，活性污泥的培養及曝氣生物濾池對污水的生物處理，厭氧顆粒污泥的培養及升流式厭氧污泥床對污水的生物處理，土壤微生物生物量的測定，土壤呼吸強度的測定，土壤脲酶活性測定，變性梯度凝膠電泳技術分析土壤中微生物的多樣性，限制性片段長度多態性技術分析土壤中微生物的多樣性，空氣中微生物數量的檢測等29個實驗，以擴展學生對微生物在工、農、環保等領域應用的認識，提高學生發現問題、提出問題、分析問題和解決實際環境及生物技術相關問題的能力，促進學生知識、能力和素質協調發展。
目次
總序
前言
第一章水環境微生物學實驗技術
實驗一水中細菌學檢測
實驗二環境水體中傷寒沙門菌的定量PCR檢測
實驗三噬菌體的分離、純化及效價測定
實驗四水中生化需氧量的測定
實驗五強化生物除磷技術
實驗六微生物脫氮技術
實驗七富營養化湖水中藻類的測定（葉綠素a法）
實驗八水體沉積物中總DNA的提取
實驗九活性污泥的培養及曝氣生物濾池對污水的生物處理
實驗十厭氧顆粒污泥的培養及升流式厭氧污泥床對污水的生物處理
第二章土壤環境微生物學實驗技術
實驗十一土壤微生物生物量的測定
實驗十二土壤呼吸強度的測定
實驗十三土壤脲酶活性測定
實驗十四變性梯度凝膠電泳技術分析土壤中微生物的多樣性
實驗十五限制性片段長度多態性技術分析土壤中微生物的多樣性
第三章氣體環境微生物學實驗技術
實驗十六空氣中微生物數量的檢測
實驗十七廢氣的生物滴濾塔處理
第四章難降解化合物微生物降解實驗技術
實驗十八酚降解菌的分離篩選、降解能力的定量測定及菌種鑒定
實驗十九木質素降解菌的分離純化及木質素酶活性測定
實驗二十半纖維素降解菌的分離篩選及木聚糖酶活性檢測
實驗二十一鹵代芳香烴降解基因的PCR檢測
第五章環境質量監測微生物學技術
實驗二十二水質微型生物群落監測泡沫塑料塊法
實驗二十三發光細菌法檢測水體及土壤的急性毒性
實驗二十四應用Ames實驗檢測水體中的致突變污染物
第六章微生物在環境領域上的應用技術
實驗二十五木質纖維素廢棄物制備燃料乙醇
實驗二十六石油污染土壤的微生物修復
實驗二十七微生物絮凝劑產生菌的篩選及絮凝劑成分分析
實驗二十八細菌冶金活性測定
實驗二十九微藻生物柴油的制備
圖版
前言
第一章水環境微生物學實驗技術
實驗一水中細菌學檢測
實驗二環境水體中傷寒沙門菌的定量PCR檢測
實驗三噬菌體的分離、純化及效價測定
實驗四水中生化需氧量的測定
實驗五強化生物除磷技術
實驗六微生物脫氮技術
實驗七富營養化湖水中藻類的測定（葉綠素a法）
實驗八水體沉積物中總DNA的提取
實驗九活性污泥的培養及曝氣生物濾池對污水的生物處理
實驗十厭氧顆粒污泥的培養及升流式厭氧污泥床對污水的生物處理
第二章土壤環境微生物學實驗技術
實驗十一土壤微生物生物量的測定
實驗十二土壤呼吸強度的測定
實驗十三土壤脲酶活性測定
實驗十四變性梯度凝膠電泳技術分析土壤中微生物的多樣性
實驗十五限制性片段長度多態性技術分析土壤中微生物的多樣性
第三章氣體環境微生物學實驗技術
實驗十六空氣中微生物數量的檢測
實驗十七廢氣的生物滴濾塔處理
第四章難降解化合物微生物降解實驗技術
實驗十八酚降解菌的分離篩選、降解能力的定量測定及菌種鑒定
實驗十九木質素降解菌的分離純化及木質素酶活性測定
實驗二十半纖維素降解菌的分離篩選及木聚糖酶活性檢測
實驗二十一鹵代芳香烴降解基因的PCR檢測
第五章環境質量監測微生物學技術
實驗二十二水質微型生物群落監測泡沫塑料塊法
實驗二十三發光細菌法檢測水體及土壤的急性毒性
實驗二十四應用Ames實驗檢測水體中的致突變污染物
第六章微生物在環境領域上的應用技術
實驗二十五木質纖維素廢棄物制備燃料乙醇
實驗二十六石油污染土壤的微生物修復
實驗二十七微生物絮凝劑產生菌的篩選及絮凝劑成分分析
實驗二十八細菌冶金活性測定
實驗二十九微藻生物柴油的制備
圖版
書摘/試閱
（2）16S rRNA基因克隆文庫
首先需獲得環境樣品的基因組總DNA，PCR擴增16S rRNA基因片段。因為使用的是直接源自于環境的含有多種微生物16S rRNA基因的混合模板，其PCR擴增與擴增純菌的16S rRNA基因不同，為了保證克隆文庫的質量，需要優化PCR反應的體系并嚴格控制反應條件。因為使用的是混合模板，而模板之間的相似性又非常高，所以基因組總DNA在16S rRNA基因擴增時容易出現錯誤，產生一些在環境中原本并不存在的假象，造成來源于不同微生物的16S rRNA基因發生共擴增、序列相近的16S rRNA基因分子之間退火、PCR擴增偏好性等誤差。使用reconditioningPCR、減少PCR循環數等，能夠一定程度上降低這些誤差。
構建環境16S rRNA基因文庫通常使用“TA克隆”的方法。使用Taq DNA聚合酶，在擴增的過程中會在16S rRNA基因PCR擴增產物的3′端加上一個脫氧腺嘌呤核苷酸，使其成為突出末端，在T4連接酶作用下，這些在3′端具有一個脫氧腺嘌呤核苷酸突出末端的PCR產物都可以與在5′端具有脫氧胸腺嘧啶核苷酸突出末端的開環T載體連接。使用T載體即可完成TA克隆。例如，Promega公司的pGEM—TEasy Vector，利用宿主上的氨芐青霉素抗性基因、lacZ基因的調控序列和部分結構基因序列，可以結合不含有氨芐青霉素抗性基因的E.coli宿主，在涂布有IPTG和X—gal的平板上，實現藍白斑篩選陽性克隆。因為只有帶質粒的克隆才能在含有氨芐青霉素的平板上生成：同時載體自連以后可以與宿主基因組上的另一部分lacZ基因序列產生α互補，在IPTG誘導下產生有活性的β—半乳糖苷酶并將X—gal切割成顯藍色的產物，因此當帶有自連載體的克隆在生長時，會表現為藍色克隆。而載體上帶有插入片段時會使lacZ基因失活，涂布在有IPTG和X—gal的平板上生長時，就會表現為白色克隆。通過藍白斑篩選可以初步篩選到有插入片段的克隆。最后通過PCR的方法進一步檢驗插入片段的大小是否正確。
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