轉染實驗技術（簡體書）

《生物實驗室系列：轉染實驗技術》覆蓋了轉染前目的基因的獲取、載體的選擇，多種轉染技術，轉染技術的應用等。作為一本實驗技術類書籍，《生物實驗室系列：轉染實驗技術》不僅較詳細地闡述了有關技術的具體操作和程序，更著力於對各種技術的基本原理及其相關理論基礎進行深層次的剖析。
《生物實驗室系列：轉染實驗技術》不僅可作為從事生命科學，特別是分子生物學相關領域工作者的實驗室必備參考工具書，同：時也可供高校相關專業師生及科學工作者對轉染實驗技術的理論做深入探討時參考。

馬文麗主編的《轉染實驗技術（生物實驗室系列）》總結多年的科研實踐經驗，系統地介紹了目的基因獲取、載體選擇、多種轉染方法以及轉染技術的應用。在編寫中我們力求內容準確且通俗易懂，語言流暢簡練、深入淺出。本書讀者對象定位于生物技術及相關專業師生，同時也可供相關科研人員參考。

出版者的話
21世紀是生命科學的世紀，這已成為人們的共識。
生命科學隨著人類對自身和自然的認識、探索而萌芽，隨著人類生產和科學實踐的進步而發展。現代生命科學包括生物學、醫學、農學等傳統學科領域，以及生物學、生物技術與環境科學乃至社會科學等其他學科相互滲透、交叉而產生的新型學科體系。20世紀后葉，現代生物科學尤其是分子生物學取得了一系列突破性成就，使得生命科學在自然科學體系中的位置發生了革命性的變化，成為21世紀的帶頭學科。人們對生命科學也寄予了無限的期望，希望能夠解決人類社會所面臨的人口膨脹、資源匱乏、疾病危害、環境污染和生態破壞等一系列重大問題。
回顧生命科學的發展歷程，實驗技術一直起著非常重要的促進作用。如17世紀Leeuwenhoek等人發明并應用顯微鏡技術，直接催生了“細胞學說”的建立和發展；1973年cohn和Boyer完成了DNA體外重組實驗，標志著基因工程的肇始；1988年Kary Mullis發明的PCR技術甚至使生命科學產生了飛躍性的發展。可以說，生命科學每時每刻離不開實驗，實驗是開啟神奇的生命王國大門的鑰匙。沒有實驗技術的不斷進步，也就沒有生命科學今天的巨大發展；同時，生命科學的發展又對實驗技術提出了更高的要求，進一步刺激了后者的不斷進步。生命科學正是在“實驗催生和驗證著基礎理論，理論指導和發展了實驗技術”的不斷循環中從必然王國走向自由王國。
工欲善其事，必先利其器。為了有助于生命科學工作者更多地了解相關實驗技術和儀器設備，更好地設計實驗方案，更有效地開展實驗過程，更合理地處理實驗結果，化學工業出版社組織出版了《生物實驗室系列》圖書。系列圖書在整體規劃的基礎上，本著“經典、前沿、實用，理論與技術并重”的原則組織編寫，分批出版。
在題材上，系列圖書涵蓋綜合實驗技術和單項實驗技術兩個方面。其中綜合實驗技術既有以實驗目的為題，如“蛋白質化學分析技術”，內容縱向覆蓋多項實驗技術；也有以某一生命學科領域的綜合實驗技術為題，如“發酵工程實驗技術”、“生物化學實驗技術”等。而單項實驗技術則以深入介紹某一專項技術及其應用為主，在闡述其基本原理的基礎上，橫向介紹該項技術在多個領域的應用，如“雙向電泳技術”、“流式細胞術”等。
在內容上，系列圖書主要有以下兩個顯著特點。一是強調先進性——除了系統介紹常用和經典實驗技術以外，特別突出了當前該領域實驗手段的新理論、新技術、新發展，為國內專業人員起到借鑒和引導作用。二是強調可操作性——對于每一項實驗技術，系統介紹其原理方法、設備儀器和實驗過程，讓讀者明了實驗的目的、方案設計以及具體步驟和結果處理，以期起到實驗指南的作用。
本系列圖書堅持質量為先，開拓國內和國際兩個出版資源。一方面，邀請國內相關領域兼具理論造詣和豐富實驗室工作經驗的專家學者編著；另一方面，時刻關注國際生命科學前沿領域和先進技術的進展，及時引進(翻譯或影印)國外知名出版社的權威力作。
《生物實驗室系列》圖書的讀者對象設定為國內從事生命科學及生物技術和相關領域(如醫學、藥學、農學)的專業研究人員，企業或公司的生產、研發、管理技術人員，以及高校相關專業的教師、研究生等。
我們殷切希望《生物實驗室系列》圖書的出版能夠服務于我國生命科學的發展需要，同時熱忱歡迎從事和關心生命科學的廣大科技人員不僅對已出版圖書提供寶貴意見和建議，也能對系列圖書的后續題目設計貢獻良策或推薦作者，以便我們能夠集思廣益，將這一系列圖書沿著可持續發展的方向不斷豐富品種，推陳出新。
謹向所有關心和熱愛生命科學，為生命科學的發展孜孜以求的科學工作者致以崇高的敬意!
祝愿我國的科技事業如生命之樹根深葉茂，欣欣向榮!
化學工業出版社生物?醫藥出版分社

第1章轉染實驗技術概述
1．1轉染實驗技術簡介
1．1．1轉染實驗技術的概念
1．1．2外源基因轉染真核細胞的目的、意義
1．2轉染實驗技術的分類及原理
1．2．1病毒感染法
1．2．2非病毒感染法
1．3轉染實驗技術的應用
1．4新材料與新技術在轉染實驗技術中的應用
參考文獻

第2章目的基因的獲取
2．1目的基因概述
2．2化學合成法獲取目的基因
2．2．1磷酸二酯法
2．2．2磷酸三酯法
2．2．3亞磷酸三酯法
2．2．4寡核苷酸連接法
2．3基因組文庫釣取目的基因
2．4cDNA文庫釣取目的基因
2．4．1mRNA的分離純化（過程）
2．4．2雙鏈cDNA的體外合成
2．5PCR獲取目的基因
2．5．1PCR擴增DNA的基本原理
2．5．2PCR擴增產物的克隆
2．5．3PCR技術在目的基因製備中的應用
2．6RT?PCR法獲取目的基因
參考文獻

第3章基因表達載體的選擇
3．1基因表達載體概述
3．2基因表達載體分類
3．3基因表達載體的遺傳標記
3．4常用原核基因表達質粒載體
3．5常用真核基因表達質粒載體
3．6病毒型表達載體
3．6．1噬菌體載體
3．6．2反轉錄病毒載體
3．6．3腺病毒載體
3．7可表達融合蛋白的載體
3．7．1谷光甘肽S?轉移酶（GST）融合蛋白載體
3．7．2pMALTM融合蛋白表達載體
3．8基因表達載體的改造
3．8．1報道基因的改造
3．8．2啟動子的研究
3．8．3大容量載體
參考文獻

第4章重組子的構建與鑒定
4．1限制性內切酶
4．2黏斷連接方法及重點技術
4．2．1單酶切位點的連接
4．2．2雙酶切位點的連接
4．2．3同工異源酶及同尾酶酶切位點的連接
4．3平端連接方法及重點技術
4．4酶切位點的改造和連接
4．4．1黏斷切口轉化為平端切口的連接
4．4．2人工接頭的設計及人工黏斷切口的製備
4．4．3酶切位點的化學修飾
4．5重組子的篩選與鑒定
4．5．1表型水平篩選
4．5．2分子水平鑒定
參考文獻

第5章化學轉染方法將重組體導入真核細胞
5．1磷酸鈣共沉澱法
5．1．1磷酸鈣共沉澱法原理
5．1．2轉染試劑、材料
5．1．3儀器設備
5．1．4操作步驟
5．1．5注意事項及影響因素
5．2DEAE?葡聚糖法轉染
5．2．1DEAE?葡聚糖法轉染原理
5．2．2轉染試劑
5．2．3儀器設備
5．2．4操作步驟
5．2．5操作注意事項
5．3脂質體介導的轉染
5．3．1脂質體介導的轉染原理
5．3．2轉染試劑
5．3．3儀器設備
5．3．4操作步驟
5．3．5操作注意事項
5．4納米材料介導的轉染
5．4．1納米材料介導的轉染原理
5．4．2轉染試劑
5．4．3儀器設備
5．4．4操作步驟
5．4．5操作注意事項
參考文獻

第6章物理轉染方法將重組體導入真核細胞
6．1顯微注射法轉染
6．1．1顯微注射法原理
6．1．2轉染試劑
6．1．3儀器設備
6．1．4操作步驟
6．1．5操作注意事項
6．2電穿孔法轉染
6．2．1電穿孔法轉染原理
6．2．2轉染試劑
6．2．3儀器設備
6．2．4操作步驟
6．2．5操作注意事項
6．3基因槍轉染
6．3．1基因槍技術的發展歷史
6．3．2基因槍介導的轉染原理和設備
6．3．3轉染試劑：微彈載體、DNA微載體
6．3．4操作步驟
6．3．5操作注意事項
6．3．6基因槍技術作為新興的轉移基因的優點
6．3．7基因槍的發展趨勢
參考文獻

第7章病毒轉染方法將重組體導入真核細胞
7．1病毒轉染系統概述
7．2包裝細胞概述
7．3高濃度病毒原液的收集及滴度測定方法
7．3．1高濃度病毒原液收集
7．3．2病毒滴度測定方法
7．4病毒轉染的輔助系統
7．4．1轉染試劑
7．4．2細胞狀態
7．4．3轉染方法
7．4．4載體構建
7．5腺病毒介導的轉染
7．5．1腺病毒介導的轉染原理
7．5．2轉染試劑
7．5．3儀器設備
7．5．4操作步驟
7．5．5操作注意事項
7．6反轉錄病毒介導的轉染
7．6．1反轉錄病毒介導的轉染原理
7．6．2轉染試劑
7．6．3儀器設備
7．6．4操作步驟
7．6．5操作注意事項
參考文獻

第8章轉染成功細胞的選擇
8．1遺傳報道基因系統
8．1．1報道基因系統概述
8．1．2報道基因的分類及使用選擇
8．1．3報道基因技術的前景展望
8．1．4常見的報道基因
8．2報道基因的同位素分析法
8．2．1放射性同位素的基本性質
8．2．2射線的防護
8．3報道基因的非同位素分析法
8．3．1酶聯免疫法（ELISA）
8．3．2熒光法
8．3．3免疫組織化學染色法
參考文獻

第9章轉染技術的應用
9．1轉基因動物及基因敲除動物
9．1．1轉基因動物的定義
9．1．2製備轉基因動物的方法
9．1．3基因敲除動物
9．2轉基因植物
9．2．1轉基因植物的定義
9．2．2常用的植物轉基因方法
9．2．3轉基因植物的主要應用方向
9．3基因製藥
9．3．1基因製藥概述
9．3．2基因工程藥物生產的基本過程
9．3．3基因製藥技術的主要應用
9．4基因治療
9．4．1遺傳性疾病的基因治療
9．4．2腫瘤基因治療
9．4．3其他疾病的基因治療
9．5RNA干擾治療
9．5．1在骨病治療中的應用
9．5．2在神經系統疾病中的應用
9．5．3在腫瘤治療中的應用
9．5．4在抗病毒治療中的應用
9．5．5在皮膚病治療中的應用
參考文獻