醫學免疫學實驗指導(簡體書)
- 系列名:國家級實驗教學示範中心全國高等院校醫學實驗教學規劃教材
- ISBN13:9787030366849
- 出版社:科學出版社
- 作者:王大軍; 車昌燕; 韓梅
- 裝訂/頁數:平裝/64頁
- 出版日:2021/02/04
商品簡介
《全國高等院校醫學實驗教學規劃教材:醫學免疫學實驗指導》可供臨床、預防、基礎、口腔、麻醉、影像、藥學、檢驗、護理、法醫、中醫等專業根據教學大綱選用,也可供從事臨床檢驗工作和醫學研究的技術人員參考使用。
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目次
實驗室規則
第一章抗原抗體反應
第一節凝集反應
Ⅰ.直接凝集反應
一、玻片凝集試驗
實驗一痢疾桿菌的血清學鑒定
實驗二ABO血型鑒定
二、試管凝集試驗
實驗三血清抗體效價的測定
實驗四肥達試驗
Ⅱ.間接凝集反應
一、間接凝集試驗
實驗五間接乳膠凝集試驗一-抗鏈球菌溶素O的檢測
實驗六間接乳膠凝集試驗——類風濕因子的檢測
二、間接凝集抑制試驗
實驗七乳膠間接凝集抑制試驗——妊娠診斷試驗
三、反向間接血凝試驗
實驗八甲胎蛋白檢測
Ⅲ.協同凝集反應
實驗九肺炎鏈球菌的快速診斷
第二節沉澱反應
Ⅰ.免疫擴散試驗
一、雙向免疫擴散試驗
實驗十雙向免疫擴散試驗
二、單向免疫擴散試驗
實驗十一人血清中IgG、IgA、IgM的測定
Ⅱ.免疫比濁
實驗十二人血清中補體C3的測定
Ⅲ.免疫電泳
實驗十三對流免疫電泳
實驗十四火箭免疫電泳
第三節補體參與的反應
實驗十五免疫溶血反應
實驗十六溶血空斑試驗
實驗十七50%溶血法(CH50)測總補體活性
第四節免疫標記技術
一、酶免疫技術
實驗十八ELISA間接法檢測血清中結核特異性IgG抗體
實驗十九ELISA雙抗體夾心法檢測HBsAg
實驗二十ELISA雙抗原夾心法檢測HBsAb
二、免疫熒光技術
實驗二十一間接免疫熒光法檢測抗核抗體(ANA)
三、放射免疫測定
四、免疫印跡
實驗二十二WesternBlot檢測組織中β-actin
五、膠體金免疫技術
實驗二十三斑點金免疫層析試驗
第二章免疫細胞的檢測
第一節免疫細胞的分離與純化
實驗二十四外周血單個核細胞的分離
第二節T細胞檢測
實驗二十五T細胞數量檢測-E花環形成試驗
實驗二十六T細胞亞群檢測——間接免疫熒光法
實驗二十七T細胞功能檢測——淋巴細胞轉化試驗
第三節NK細胞活性檢測
實驗二十八NK細胞活性檢測
第四節中性粒細胞功能檢測
實驗二十九中性粒細胞吞噬功能的測定
第五節巨噬細胞吞噬功能檢測
實驗三十小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬實驗
第三章細胞因子及其他免疫分子的檢測
實驗三十一IL-2活性檢測
實驗三十二ELISA雙抗體夾心法檢測TNF-α
實驗三十三放射免疫分析法檢測IL-1β
實驗三十四ELISA法檢測IFN-γ
第四章抗體的製備
第一節多克隆抗體的製備
實驗三十五傷寒桿菌抗血清的製備
第二節單克隆抗體的製備
實驗三十六單克隆抗體的製備
第五章綜合性、設計性實驗
實驗三十七小鼠抗綿羊紅細胞多克隆免疫血清的製備及效價檢測
實驗三十八中草藥對小鼠免疫功能的影響
實驗三十九環磷醯胺對小鼠免疫功能的抑制作用
實驗四十慢性乙型肝炎患者機體免疫功能的檢測
參考文獻
附錄1常用溶液的配製
附錄2醫學免疫學實驗報告冊
書摘/試閱
(二)乳酸脫氫酶(LDH)釋放法
(實驗原理)
乳酸脫氫酶(LDH)是活細胞的胞質內含酶之一,在正常情況下,不能透過細胞膜。當靶細胞受到效應細胞的攻擊而損傷時,細胞膜通透性改變,LDH可釋放至介質中。釋放出來的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的過程中,使氧化型輔酶Ⅰ(NAD+)變成還原型輔酶Ⅰ(NADH2),后者再通過遞氫體—吩嗪二甲酯硫酸鹽(PMS)還原碘硝基氯化氮唑藍(INT)或硝基氯化四氮唑藍(NBT)形成有色的甲臢類化合物,在490nm或570nm波長處有一高吸收峰,利用讀取的OD值,經過計算即可得知NK細胞活性。
(實驗材料)
(1)LDH底物溶液(臨用前配制)。
(2)1%NP—40:用RPMI—1640培養液配制。
(3)1mol/L枸櫞酸終止液。
(4)靶細胞:檢測人的NK細胞活性常用的靶細胞為體外傳代細胞株K562。檢測小鼠NK細胞活性常用的靶細胞是YAC—1細胞株。實驗時一般采用24~48h培養的靶細胞。
(5)效應細胞:從人外周血(肝素抗凝)分離的單個核細胞或小鼠脾細胞。
(6)其他:酶標儀、含15%FCS的RPMI—1640營養液及淋巴細胞分層液、CO2培養箱、Hank液(pH7.2~7.4)等。
(實驗方法)
1.LDH底物溶液的配制 硝基氯化四氮唑藍(NBT)4mg,氧化型輔酶Ⅰ10mg,吩嗪二甲酯硫酸鹽(PMS)1mg,加蒸餾水2ml溶解,混勻后取上液1.6ml加1mol/L乳酸鈉0.4ml,然后加入0.1mol/L pH7.4 PBS至10ml。
2.靶細胞的制備 取培養24~48h的靶細胞,洗滌3次,最后用完全RPMI—1640培養液調整細胞濃度至1×105/ml,備用。
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