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商品簡介
名人/編輯推薦
序
目次
書摘/試閱
商品簡介
本書第一部分講解了動物細胞培養的基本概念、基本知識、準備工作、基本技術和方法、應用研究，以及干細胞技術等，每個章節有單元小結、相關鏈接和復習思考題。第二部分是第一部分涉及的相關實驗教程，包括經典實驗和干細胞培養等技術實驗。
本書是動物細胞培養技術的實用實訓型教材，可供醫學(臨床，基礎)、藥學、生命科學等相關專業本科學生使用，也可作為相關專業研究生以及實驗技術操作人員的參考用書。
名人/編輯推薦
《動物細胞培養技術》是動物細胞培養技術的實用實訓型教材，可供醫學（臨床，基礎）、藥學、生命科學等相關專業本科學生使用，也可作為相關專業研究生以及實驗技術操作人員的參考用書。
序
在多年的本科教育教學工作中，我們感覺現有的教學條件和教學方法已經很難適應越來越快的發展需要。由于缺乏適合本科生實用的《細胞培養技術》相關教材和實驗指導材料，遂產生編寫《動物細胞培養技術》教材的想法，目的是編寫實用實訓型教材，包括實驗指導部分，這既符合醫學等相關專業培養需要，又緊跟前沿領域技術，使學生更有效地掌握實驗操作技能，從而具有可持續發展的空間。
本教材第一部分內容包括動物細胞培養的基本概念，動物細胞培養的基本知識，動物細胞培養的準備工作，動物細胞培養的基本技術和方法，動物細胞培養在醫學研究領域的應用和特殊細胞培養，以及干細胞技術，包括誘導多能干細胞（iPS細胞）技術等。第二部分包括每一部分涉及的主要實驗實訓材料。本教材創新之處主要體現在內容的廣度，它涉及干細胞領域和人類誘導的多能干細胞（iPS細胞）技術，使學生較早接觸這個新型領域和前沿技術。
本教材適用于醫學、藥學、生命科學等相關專業本科學生，以及相關專業研究生教學訓練，也可作為實驗技術人員和自學入門者的參考書。
本書在編寫過程中得到了杭州師范大學攀登工程基金(國家規劃教材培育)、浙江省自然科學基金(編號Y2080747)和杭州市科技發展計劃項目基金(編號20100333T15)，杭州市重點實驗室項目(實驗動物科學實驗室)的部分經費支持。杭州師范大學的同仁，上海復旦大學，澳門大學，山西醫科大學和上海斯丹賽生物有限公司干細胞實驗室的專家和教授參與了部分章節的編寫和校對工作，在此一并致謝。
由于編寫的時間和經驗有限，疏漏之處在所難免，敬請讀者批評指正。
劉小玲
2012年12月
本教材第一部分內容包括動物細胞培養的基本概念，動物細胞培養的基本知識，動物細胞培養的準備工作，動物細胞培養的基本技術和方法，動物細胞培養在醫學研究領域的應用和特殊細胞培養，以及干細胞技術，包括誘導多能干細胞（iPS細胞）技術等。第二部分包括每一部分涉及的主要實驗實訓材料。本教材創新之處主要體現在內容的廣度，它涉及干細胞領域和人類誘導的多能干細胞（iPS細胞）技術，使學生較早接觸這個新型領域和前沿技術。
本教材適用于醫學、藥學、生命科學等相關專業本科學生，以及相關專業研究生教學訓練，也可作為實驗技術人員和自學入門者的參考書。
本書在編寫過程中得到了杭州師范大學攀登工程基金(國家規劃教材培育)、浙江省自然科學基金(編號Y2080747)和杭州市科技發展計劃項目基金(編號20100333T15)，杭州市重點實驗室項目(實驗動物科學實驗室)的部分經費支持。杭州師范大學的同仁，上海復旦大學，澳門大學，山西醫科大學和上海斯丹賽生物有限公司干細胞實驗室的專家和教授參與了部分章節的編寫和校對工作，在此一并致謝。
由于編寫的時間和經驗有限，疏漏之處在所難免，敬請讀者批評指正。
劉小玲
2012年12月
目次
第一部分動物細胞培養技術1
第一章緒論1
第一節動物細胞培養的基本概念1
第二節動物細胞培養技術發展史2
第三節動物細胞培養技術的應用4
第二章動物細胞培養的基本知識6
第一節培養細胞的細胞生物學特征6
第二節培養細胞的生長條件9
第三節細胞培養實驗室要求11
第三章動物細胞培養的準備工作13
第一節細胞培養用品的清洗、包裝和滅菌13
第二節細胞培養常用液體分類、配制和無菌處理16
第四章動物細胞培養的基本技術和方法21
第一節培養細胞的取材與分離21
第二節動物細胞的原代培養26
第三節培養細胞的觀察和檢測30
第四節動物細胞傳代培養34
第五節動物細胞的凍存、復蘇和運輸36
第六節特殊細胞培養39
第五章動物細胞培養的應用研究56
第一節細胞培養在功能與分化研究中的應用56
第二節細胞培養在病毒學研究中的應用64
第三節細胞培養在腫瘤學研究中的應用67
第四節細胞培養在免疫學研究中的應用78
第五節細胞培養在藥理學研究中的應用85
第六節細胞毒性檢測102
第七節功能性細胞的制備109
第六章干細胞技術116
第一節概述116
第二節成體干細胞的分離培養119
第三節胚胎干細胞體外培養與定向誘導分化122
第四節誘導多能干細胞（iPS細胞）技術126
第五節胚胎干細胞／iPS細胞的應用及意義133
第二部分動物細胞培養實驗教程138
實驗一動物細胞培養的無菌操作138
實驗二動物細胞培養常用設備的使用138
實驗三動物細胞培養實驗玻璃器皿的清洗、包裝和高壓蒸汽滅菌140
實驗四動物細胞培養常用液體配制和無菌處理142
實驗五細胞計數和密度換算146
實驗六乳鼠腎細胞原代培養147
實驗七乳鼠心肌細胞原代培養149
實驗八培養細胞的觀察150
實驗九培養細胞的傳代151
實驗十細胞凍存技術152
實驗十一細胞的復蘇和活力檢測153
實驗十二異體動物接種成瘤實驗155
實驗十三腫瘤細胞的軟瓊脂集落實驗156
實驗十四動物細胞融合157
實驗十五細胞克隆158
實驗十六電穿孔法轉染細胞161
實驗十七陽離子脂質體介導真核細胞轉染162
實驗十八飼養細胞的制備和飼養層細胞培養163
實驗十九小鼠胚胎干細胞培養166
實驗二十小鼠成纖維細胞培養168
實驗二十一磷酸鈣法轉染HEK293T細胞171
實驗二十二病毒包裝及病毒滴度測定172
實驗二十三小鼠iPS細胞的誘導173
附錄細胞培養技術常用術語中英文對照175
參考文獻184
第一章緒論1
第一節動物細胞培養的基本概念1
第二節動物細胞培養技術發展史2
第三節動物細胞培養技術的應用4
第二章動物細胞培養的基本知識6
第一節培養細胞的細胞生物學特征6
第二節培養細胞的生長條件9
第三節細胞培養實驗室要求11
第三章動物細胞培養的準備工作13
第一節細胞培養用品的清洗、包裝和滅菌13
第二節細胞培養常用液體分類、配制和無菌處理16
第四章動物細胞培養的基本技術和方法21
第一節培養細胞的取材與分離21
第二節動物細胞的原代培養26
第三節培養細胞的觀察和檢測30
第四節動物細胞傳代培養34
第五節動物細胞的凍存、復蘇和運輸36
第六節特殊細胞培養39
第五章動物細胞培養的應用研究56
第一節細胞培養在功能與分化研究中的應用56
第二節細胞培養在病毒學研究中的應用64
第三節細胞培養在腫瘤學研究中的應用67
第四節細胞培養在免疫學研究中的應用78
第五節細胞培養在藥理學研究中的應用85
第六節細胞毒性檢測102
第七節功能性細胞的制備109
第六章干細胞技術116
第一節概述116
第二節成體干細胞的分離培養119
第三節胚胎干細胞體外培養與定向誘導分化122
第四節誘導多能干細胞（iPS細胞）技術126
第五節胚胎干細胞／iPS細胞的應用及意義133
第二部分動物細胞培養實驗教程138
實驗一動物細胞培養的無菌操作138
實驗二動物細胞培養常用設備的使用138
實驗三動物細胞培養實驗玻璃器皿的清洗、包裝和高壓蒸汽滅菌140
實驗四動物細胞培養常用液體配制和無菌處理142
實驗五細胞計數和密度換算146
實驗六乳鼠腎細胞原代培養147
實驗七乳鼠心肌細胞原代培養149
實驗八培養細胞的觀察150
實驗九培養細胞的傳代151
實驗十細胞凍存技術152
實驗十一細胞的復蘇和活力檢測153
實驗十二異體動物接種成瘤實驗155
實驗十三腫瘤細胞的軟瓊脂集落實驗156
實驗十四動物細胞融合157
實驗十五細胞克隆158
實驗十六電穿孔法轉染細胞161
實驗十七陽離子脂質體介導真核細胞轉染162
實驗十八飼養細胞的制備和飼養層細胞培養163
實驗十九小鼠胚胎干細胞培養166
實驗二十小鼠成纖維細胞培養168
實驗二十一磷酸鈣法轉染HEK293T細胞171
實驗二十二病毒包裝及病毒滴度測定172
實驗二十三小鼠iPS細胞的誘導173
附錄細胞培養技術常用術語中英文對照175
參考文獻184
書摘/試閱
4.細胞霉試驗
（1）51Cr釋放法
用Na2 51 CrO4標記靶細胞，若待檢CTL能殺傷靶細胞，則51 Cr可從被殺傷的靶細胞內釋放出來，用7計數儀測定51Cr放射活性。通過計算51Cr特異釋放率，判斷殺傷靶細胞的細胞毒活性。
（2）乳酸脫氫酶釋放法
乳酸脫氫酶（LDH）存在于細胞內，正常時不能透過細胞膜，當細胞受損傷或死亡時，細胞膜通透性增高，LDH可釋放到細胞外，此時細胞培養液中LDH活性與細胞死亡數目成正比，用比色法測定LDH活性，可計算出效應細胞的殺傷活性。本法具有操作簡便快捷、自然釋放率低等優點，可用于CTL及NK細胞活性測定，也可測定藥物、化學物質或放射引起的細胞毒性。應注意較高濃度FCS中所含的LDH可能會干擾結果。
（3）細胞染色法
在補體依賴性細胞毒試驗中，細胞表面抗原與相應抗體結合后，在補體的參與下，通過激活補體引起靶細胞膜損傷，導致細胞膜的通透性增加、細胞溶解。用臺盼藍等染料進行細胞染色，染料可通過損傷的細胞膜進入細胞內使細胞著色，故可用于指示死細胞或瀕死細胞，而活細胞不著色。通過顯微鏡計數著色的死亡細胞數所占總細胞數的比率，判斷細胞死亡率。
（4）凋亡細胞檢測法
目前檢測細胞凋亡的方法已有很多，包括形態學檢測法、瓊脂糖凝膠電泳法、原位末端標記法（TUNEL法）和FCM等。
5.細胞因子的檢測
細胞因子檢測不僅有助于臨床疾病的診斷、預后判斷和療效觀察，還是評估機體免疫狀態的一個重要指標。目前，細胞因子的檢測方法主要有生物活性檢測法、免疫學檢測法和分子生物學檢測法。
（1）生物活性檢測法
根據不同的細胞因子具有不同的生物活性，可采用相應的檢測方法。這些方法敏感性較高，但可能特異性不高、操作繁瑣且易受干擾等。
①細胞增殖或增殖抑制法。某些細胞必須依賴某種細胞因子才能生長（細胞依賴株），如CTLL—2細胞株的生長依賴IL—2；而某些細胞因子能抑制細胞株的增殖，如IL—1對黑色素瘤細胞A352具有抑制作用。在一定濃度范圍內，細胞增殖或細胞抑制程度與所加細胞因子的含量呈正相關。通過測定細胞增殖或生長抑制水平（3 H—TdR摻人法或MTT法等），并與標準品進行對比，可得到樣本中所測細胞因子的含量。
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