病原生物學實驗（簡體書）

本書內容共分醫學微生物學實驗技術、人體寄生蟲學實驗和分子微生物學實驗技術等三篇十七章。具體內容包括：細菌形態學檢查法、細菌的培養等。

《全國高等醫藥院校國家級實驗教學示范中心"十二五"規劃教材:病原生物學實驗(供臨床醫學、基礎醫學、護理學、醫學檢驗等專業使用)》力求簡明實用，使其適合各專業層次的教學實踐的需要，同時也能為醫學本科生、研究生提供一些基本的科研實驗方法。

第一篇醫學微生物學實驗技術
第一章細菌形態學檢查法／3
實驗一不染色標本的檢查／3
實驗二革蘭氏染色法／4
實驗三抗酸染色法／6
實驗四莢膜染色法／7
實驗五鞭毛染色法／8
實驗六芽胞染色法／9
第二章細菌的培養／10
實驗一培養基的制備／10
實驗二細菌的培養方法及生長狀態的觀察／18
實驗三細菌的生化反應檢查法／23
實驗四內毒素的檢測／26
實驗五細菌致病性的實驗／27
第三章理化及生物因素對細菌的影響／30
實驗一常用消毒滅菌法／30
實驗二噬菌體特異性溶菌試驗／34
實驗三細菌的藥物敏感性試驗／35
實驗四細菌的變異性試驗／40
第四章化膿性球菌的病原學檢測／44
實驗一化膿性球菌的接種及其生長狀態觀察／45
實驗二化膿性球菌的生化反應／46
實驗三化膿性球菌的血清學試驗／49
實驗四化膿性球菌的動物實驗／51
第五章腸道感染細菌的病原學檢測／53
實驗一常用培養基的制備／54
實驗二腸道桿菌的生長狀態觀察／59
實驗三腸道桿菌的血清學試驗／60
實驗四生化試驗和微量編碼測定法／62
實驗五肥達試驗／65
實驗六霍亂弧菌的檢查／68
第六章幽門螺桿菌實驗檢測／71
實驗一幽門螺桿菌的形態及染色觀察／71
實驗二幽門螺桿菌的生化鑒定／72
第七章厭氧性細菌檢查／73
實驗一厭氧培養法／73
實驗二厭氧性芽胞桿菌形態及生長狀態的觀察／75
第八章呼吸道感染細菌檢測／77
實驗一結核分枝桿菌檢測／77
實驗二白喉棒狀桿菌的檢查／79
第九章其他微生物的檢查／83
實驗一支原體、衣原體、立克次體的檢查／83
實驗二螺旋體的檢查／93
第十章病毒學實驗／100
實驗一病毒的形態學檢查法／100
實驗二病毒培養法／105
實驗三病毒數量與感染性的測定／112
實驗四流感病毒的分離與鑒定／114
實驗五乙型肝炎病毒的血清學檢測法／119
實驗六小兒腹瀉病原體——A組輪狀病毒感染的檢測／124
實驗七TORCH感染的檢測／127
第十一章真菌和放線菌的檢查／133
實驗病原性真菌和放線菌的檢查／133
第二篇人體寄生蟲學實驗
第十二章線蟲／149
實驗一似蚓蛔線蟲／149
實驗二十二指腸鉤口線蟲和美洲板口線蟲／152
實驗三蠕形住腸線蟲／155
實驗四毛首鞭形線蟲／157
實驗五馬來布魯線蟲和班氏吳策線蟲／158
實驗六旋毛形線蟲／160
第十三章吸蟲實驗／161
實驗一華支睪吸蟲／161
實驗二衛氏并殖吸蟲（肺吸蟲）／163
實驗三布氏姜片吸蟲（姜片蟲）／165
實驗四日本裂體吸蟲（日本血吸蟲）／167
第十四章絳蟲實驗／174
實驗一帶絳蟲／174
實驗二棘球絳蟲／177
實驗三微小膜殼絳蟲（短膜殼絳蟲）／179
實驗四曼氏迭宮絳蟲／180
第十五章醫學原蟲／183
實驗一溶組織內阿米巴／183
實驗二結腸內阿米巴／184
實驗三陰道毛滴蟲／185
實驗四藍氏賈第鞭毛蟲／186
實驗五杜氏利什曼原蟲／187
實驗六瘧原蟲／188
實驗七其他醫學原蟲／189
第十六章昆蟲實驗／193
實驗一蚊／193
實驗二白蛉／196
實驗三蠅／198
實驗四蚤／201
實驗五虱及臭蟲／202
實驗六蜱／204
實驗七螨／205
第三篇分子微生物學實驗技術
第十七章基因診斷及應用技術／209
實驗一基因組DNA的提取／209
實驗二細菌質粒DNA的提取／211
實驗三耐藥質粒DNA轉化實驗／213
實驗四PCR方法檢測病原微生物／214
實驗五核酸雜交法檢測病原微生物／216
參考文獻／220
彩圖／221

一、中國藍瓊脂平板
中國藍和薔薇色酸在本培養基中均作為指示劑，在酸性環境下，中國藍為藍色，薔薇色酸為黃色，在堿性環境下，中國藍由微藍至五色，薔薇色酸為紅色。此培養基制好后的pH值為7.4，應呈淡紫紅色。過堿呈鮮紅色，過酸則呈藍色，均不能用。薔薇色酸能抑制革蘭氏陽性細菌的生長，對大腸埃希菌沒有抑制作用，故糞便標本接種量不宜太多。多數腸道致病菌不分解乳糖，其菌落為透明或半透明，淡紅色或五色；大腸埃希菌分解乳糖產酸，形成大而渾濁的藍色菌落。
實驗材料
（1）1％蛋白胨瓊脂培養基100mL、1％中國藍水溶液（無菌）1mL、1％薔薇色酸乙醇溶液1mL、乳糖1g。
（2）三角燒瓶、無菌培養皿等。
實驗方法
（1）稱取乳糖加入50℃1％蛋白胨瓊脂培養基內，混勻、溶解，分裝在三角燒瓶中，用棉塞塞好。
（2）置于高壓蒸汽滅菌器內以55.16kPa滅菌20min。
（3）取出后待冷卻至45～50℃時，無菌操作加入中國藍水溶液和薔薇色酸乙醇溶液混勻。
（4）以無菌擬作傾注無菌培養皿內凝固后備用。
二、伊紅亞甲藍（EMB）瓊脂平板
伊紅和亞甲藍在培養基中起指示劑作用，如大腸埃希菌分解乳糖產酸使pH值降低，致使伊紅和亞甲藍相結合呈紫黑色或紫紅色化合物，故菌落呈紫黑色或紫紅色，且有金屬光澤。在堿性環境中，伊紅和亞甲藍不能結合，故不分解乳糖的細菌菌落為無色。同時伊紅和亞甲藍還有抑菌劑的作用，能抑制除糞鏈球菌以外的革蘭氏陽性菌的生長。
實驗材料
（1）成分蛋白胨10g、乳糖5g、蔗糖5g、磷酸氫二鉀2g、2％伊紅水溶液20mL、0.65％亞甲藍水溶液10mL、瓊脂18～20g、蒸餾水1000mL、氫氧化鈉水溶液。
（2）容量瓶、無菌培養皿等。
實驗方法
（1）配制2％伊紅水溶液，0.65％亞甲藍水溶液，55.16kPa滅菌20min備用。
（2）稱取蛋白胨、乳糖、蔗糖、磷酸氫二鉀、瓊脂粉溶于800mL蒸餾水中，用氫氧化鈉溶液調整pH值至7.0～7.2，定容至1000mL。
（3）經55.16kPa滅菌20min，取出后待瓊脂培養基冷卻至50℃時，無菌操作加入2％伊紅水溶液，0.65％亞甲藍水溶液，混勻傾注無菌培養皿內凝固后，置于4℃保存備用。
三、SS瓊脂平板
SS瓊脂平板是分離沙門菌屬及志賀菌屬的強選擇培養基，對大腸埃希菌有較強的抑制作用，而對腸道其他病原菌則無明顯抑制作用。因此，可以增加糞便等標本的接種量，從而提高病原菌的檢出率。故SS瓊脂平板為目前公認比較滿意的腸桿菌科細菌選擇性培養基。SS瓊脂為強選擇性培養基之一，成分較多，按作用大致可以分為以下幾種。
（1）營養物質：牛肉膏、蛋白胨。
（2）選擇性抑菌劑：膽鹽、硫代硫酸鈉、檸檬酸鈉、檸檬酸鐵、煌綠等。
（3）促進目的菌生長劑：膽鹽促進病原菌生長，特別是沙門菌屬的生長。
（4）鑒別用糖：乳糖。
（5）指示劑：中性紅。