食用菌學實驗教程（簡體書）

總序
前言
實驗一母種、原種、栽培種的制作
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題
六、參考文獻
實驗二菌種分離技術
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題 總序
前言
實驗一母種、原種、栽培種的制作
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題
六、參考文獻
實驗二菌種分離技術
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題
六、參考文獻
實驗三液體菌種制作技術
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題
六、參考文獻
實驗四菌種保藏方法
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題
六、參考文獻
實驗五平菇不同菌株的酯酶同工酶凝膠電泳鑒定
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題
六、參考文獻
實驗六RAPD檢測平菇菌株間基因組差異
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題
六、參考文獻
實驗七平菇栽培技術
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題
六、參考文獻
實驗八香菇栽培技術
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題
六、參考文獻
實驗九金針菇栽培技術
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題
六、參考文獻
實驗十黑木耳栽培技術
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題
六、參考文獻
實驗十一雙孢蘑菇栽培技術
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題
六、參考文獻
實驗十二雞腿菇栽培技術
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題
六、參考文獻
實驗十三草菇栽培技術
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題
六、參考文獻
實驗十四杏鮑菇栽培技術
一、實驗目的
一、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題
六、參考文獻
實驗十五白靈菇栽培技術
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題
六、參考文獻
實驗十六靈芝栽培技術
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題
六、參考文獻
實驗十七蛹蟲草栽培技術
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、思考題
六、參考文獻
實驗十八香菇烘干技術
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、實驗結果
六、思考題
七、參考文獻
實驗十九雙孢蘑菇罐頭加工技術
一、實驗目的
二、實驗原理
三、實驗材料
四、實驗步驟
五、實驗結果
六、思考題
七、參考文獻
……
實驗二十食用菌子實體總糖含量的測定
實驗二十一食用菌子實體粗蛋白含量的測定
實驗二十二香菇多糖的粗分離及含量測定
實驗二十三巨大革耳子實體漆酶的分離純化
實驗二十四茶樹菇子實體凝集素的分離純化

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實驗一 母種、原種、栽培種的制作 <br> 一、實驗目的 <br> 1. 掌握食用菌母種培養基的制作、滅菌、母種轉接等操作技術和方法。 <br> <br> 2. 掌握食用菌原種的制作方法和接種技術。 <br> <br> 3. 掌握食用菌栽培種的制作方法和接種技術。<br> <br> <br> 二、實驗原理<br> 母種又稱一級種，常用試管作為容器，故又稱試管種。是指經組織分離、孢子分離或基內菌絲分離而得到的具有結實性的菌絲體純培養物及繼代培養物。母種的制作過程分為培養基的制作、滅菌、接種和培養。<br> 原種又稱二級種，是指把培養好的優良母種轉接到谷粒、棉籽殼、木屑或糞草等原料制成的培養基上，使其進一步擴大繁殖而成的菌種。原種常用透明的玻璃瓶、塑料瓶或聚丙烯塑料袋作為容器，主要用來繁殖三級種。不同菇類的原種培養基成分不同。一般草腐菌（雙孢蘑菇、草菇等）可用糞草為主要原料作培養基；木腐菌（香菇、平菇等）培養基可用木屑或棉籽殼為主要原料來配制；谷粒培養基適合于大多數食用菌生長。隨著食用菌產業的發展，用作原種培養基的原料來源會越來越廣泛。<br> 栽培種又稱三級種，是由原種轉接、擴繁到相同或相似培養基上培養而制成的菌種，制作方法基本上與原種相同。菇類不同，制備栽培種所用培養基的成分也有差異，常用培養料有木屑、棉籽殼、糞草等。栽培種常用聚丙烯塑料袋作為容器，使用時要仔細檢查塑料袋有無沙眼或破損，否則容易造成污染。<br> 三、實驗材料<br> 1. 母種制作 <br> 馬鈴薯、葡萄糖或蔗糖、瓊脂、 pH試紙（或 pH計）、1 mol/L NaOH溶液、1 mol/L HCl溶液、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、維生素 B1。<br> <br> 2. 原種制作 <br> 麥粒、石膏粉、碳酸鈣、棉籽殼（或木屑）、麥麩（或米糠）、蔗糖、過磷酸鈣、母種。<br> 3. 栽培種制作<br> <br> 棉籽殼（或木屑）、麥麩（或米糠）、過磷酸鈣、蔗糖、原種。<br> <br> 4. 其他<br> <br> <br> 手提式高壓滅菌鍋、立式（臥式）高壓滅菌鍋、接種箱或接種室、電熱恒溫<br> ·2·食用菌學實驗教程<br> 培養箱、培養室、分裝漏斗、搪瓷缸、電磁爐、紗布、 18 mm×180 mm試管、牛皮紙、酒精燈、 75%酒精棉球、接種工具、記號筆、菌種瓶（菌種袋）、天平、盤秤等。<br> 四、實驗步驟<br> （一）母種的制作<br> 1．培養基的制作<br> 為獲得優良和生長旺盛的母種，母種培養基的成分應選用營養豐富、容易被菌絲吸收利用的原料來進行配制。因為不同菌類對營養物質的需求不同，所以不同母種培養基的成分和比例也各有差異。食用菌常用的母種培養基配方有馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基（PDA培養基）和 PDA綜合培養基，配方如下： <br> PDA培養基：馬鈴薯（去皮） 200 g，葡萄糖（或蔗糖）20 g，瓊脂 18～20 g，水 1000 mL，pH自然。 <br> PDA綜合培養基：馬鈴薯（去皮） 200 g，葡萄糖（或蔗糖）20 g，磷酸二氫鉀 3 g，硫酸鎂 1.5 g，維生素 B1 10 mg，瓊脂 18～20 g，水 1000 mL，pH自然。<br> 配制過程（以配制 1000 mL為例）<br> 1）馬鈴薯去皮洗凈，稱取 200 g成 1 cm3小塊或 2～3 mm厚的薄片。，切：<br> 2<br> ）將切好的馬鈴薯加入到 1000 mL自來水中，電磁爐上煮沸后維持 15～20 min，至馬鈴薯熟而不爛，4層或 8層預濕的紗布過濾，濾液補水至 1000 mL。 <br> <br> 3<br> ）將稱好的瓊脂加入到濾液中，在電磁爐上用小火加熱，邊煮邊攪拌，防止瓊脂糊底，直至瓊脂完全融化，再加入葡萄糖等可溶性物質，攪拌均刀。 <br> <br> 4）調節 <br> pH：PDA培養基配好后，pH一般為中性，不必調節。若培養其他食用菌菌絲體，如猴頭菌，需將培養基調節至昀適 pH范圍。如培養基低于所要求的 pH時，應向培養基中滴加 1 mol/L NaOH溶液；若培養基高于所要求的 pH，應滴加 1 mol/L HCl溶液進行調節。邊滴入，邊攪拌，邊用精密 pH試紙或 pH計測定，直至合適為止。應該注意培養基的酸堿度在滅菌前不宜調至 pH 6.0以下，否則滅菌后培養基不凝固。有些菇類的培養基要求 pH 6.0以下時，要求滅菌后在無菌條件下滴加鹽酸或乳酸等進行調節。pH調節好后，加水定容至 1000 mL。 <br> <br> 5<br> ）分裝試管：配制好的培養基應趁熱用分裝漏斗進行分裝，常選用 18 mm× 180 mm玻璃試管，每個試管分裝 10 mL左右培養基，一般裝入試管高度的 1/5～1/4，分裝時應注意不得使培養基粘在試管的口壁上，以防止雜菌污染。培養基分裝完以后立即塞上大小合適的棉塞或透氣的膠塞。將塞好棉塞的試管 7或 9支扎成一把，在棉塞外面包一層防潮紙或牛皮紙，防止滅菌時棉塞被冷凝水打濕。<br> <br> <br> 2. 滅菌<br> 培養基分裝完后立即采用高壓滅菌鍋進行滅菌。一般馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基<br> 實驗一 母種、原種、栽培種的制作 ·3·<br> 采用 0.103～0.110 MPa的壓強，滅菌 20～30 min。滅菌時應注意以下幾個方面： <br> 1<br> ）將滅菌物品直立放入內鍋，試管口或三角瓶口向上且不要貼鍋邊，避免冷凝水浸入試管或三角瓶。滅菌物品不要裝得太滿，留出一定空間，便于蒸汽流通，否則易造成滅菌不徹底和培養基粘在容器的口壁上而發生污染。 <br> <br> 2<br> ）蓋鍋蓋時應將鍋蓋上的排氣管插入鍋內壁管孔內，然后對角線方向擰緊鍋蓋上的螺絲，并將放氣閥直立打開，安全閥橫向關閉。 <br> <br> 3<br> ）將滅菌鍋通電加熱，當鍋內蒸汽大量排出時再繼續排氣 3～5 min，以便排凈鍋內的冷空氣，然后關閉放氣閥。 <br> <br> 4<br> ）當壓力表指針達到所需壓力時開始計時，維持 20～30 min。滅菌結束待壓力表指針自然回到“ 0”位時打開放氣閥，排出鍋內剩余蒸汽后，打開鍋蓋。注意切忌在壓力表未到“ 0”位時就放汽，以免試管內的培養基向上沖浸濕棉塞，造成以后菌種的污染。<br> <br> <br> 3. 擺斜面<br> 試管取出后一定要趁熱擺斜面，斜面的長度一般為試管長度的 3/5。用于保藏菌種的試管斜面應適當短些。<br> 4. 接種和培養<br> 將制作好的斜面培養基放進接種室、接種箱或超凈工作臺內，用紫外燈（或化學藥品，如氣霧消毒盒等）消毒 30 min以上，關閉紫光燈或熏蒸消毒 20 min后，再開始進入接種室內進行接種。<br> 接種時要嚴格按照無菌操作規程進行操作，具體接種方法如下： <br> 1<br> ）左手平托兩支試管，手指按住試管底部，外側一支是供接種用的菌種試管，內側一支是待接母種的試管。 <br> <br> 2<br> ）右手拿接種針或接種鏟，用拇指、食指和中指握住其柄部，將接種針或接種鏟插入 75%乙醇消毒瓶中，在酒精燈火焰上灼燒接種針或接種鏟的頂端，逐漸將桿部也在火焰上慢慢通過，這樣反復 3次即可將接種針或接種鏟徹底滅菌，切記昀后一次灼燒后不能再浸入乙醇消毒瓶中，應在火焰旁自然冷卻。 <br> <br> 3<br> ）將左手平托的兩支試管管口靠近火焰，用右手的小指和手掌將外側的菌種管上的棉塞拔出，再用中指和無名指拔出內側試管口上的棉塞夾在手中，不得放在桌子上或臺面上，將兩支試管口迅速移到酒精燈火焰旁邊。 <br> <br> 4<br> ）將燒過并冷卻的接種針或接種鏟伸入母種試管中，在菌絲斜面上勾取火柴頭大小的一塊菌絲塊，迅速放到待接試管斜面的中部，將試管口在火焰上燒一下，然后立即塞上棉塞。 <br> <br> 5<br> ）接種完畢，再將接種針或接種鏟在火焰上灼燒滅菌。以免使接種的菌絲擴散，造成污染。 <br> <br> 6<br> ）菌種接完后，貼好標簽或用記號筆在試管壁上注明菌種名稱及接種日期等。 <br> <br> 7<br> ）將同類菌種扎好，置于該菌所要求的適宜溫度下（恒溫箱或恒溫室內）培養，<br> <br> <br> <br> <br> ·4·食用菌學實驗教程<br> 一般培養 2 d，檢查有無雜菌生長，7～15 d母種菌絲即可長滿斜面。<br> 5. 母種質量檢查<br> 通過培養，在試管斜面上長出潔白、粗壯的菌絲體，說明接種成功。若在試管斜面上出現有光澤、黏液狀培養物或呈黃、綠、灰、黑等毛狀物時，即是污染，不能使用。優良菌種的感觀應具備“純、正、壯、潤、香”的特點：“純”指菌種的純度高，未感染雜菌，無斑塊、無抑制線，無“退菌、斷菌”現象；“正”指菌絲生長無異常，具有親本正宗的特點；“壯”指菌絲發育粗壯，長勢旺盛，有力；“潤”指菌種含水量適中，無干縮、松散現象；“香”指具有品種特有的香味、無異味。而菌種生產性能（產量高低、品質優劣、抗逆性強弱）的考核，通常只有根據栽培試驗的結果才能得出結論。<br> （二）原種的制作<br> 1．麥粒種的制作方法<br> （1）配方 麥粒 98%，石膏粉 1%，碳酸鈣 1%。<br> （2）制作過程按比例稱取麥粒、石膏粉和碳酸鈣，將稱好的麥粒用清水清洗幾次，去掉雜質，再用清水浸泡 16～24 h，至麥粒充足吸收水分，但不過分膨脹和不開口為宜。將泡好的麥粒放在鍋內，加水浸過麥粒，放在電磁爐上煮，邊煮邊攪拌，煮到種子內無白心為止，切不可將種皮煮破。將煮好的麥粒撈出控干水，使麥粒含水量為 55%～60%。再將稱好的石膏粉和碳酸鈣與麥粒攪拌均刀，裝瓶，裝至瓶肩處。裝好瓶后，用棉塞或透氣塞塞住瓶口，再包一層防潮紙（或牛皮紙），用線繩將瓶口扎好，準備滅菌。<br> <br> （3）滅菌方法同前，滅菌壓強一般為 0.124～0.135 MPa，滅菌時間為 1.5～2.0 h。<br> <br> （4）接種培養接種間消毒同前。接種時一般兩個人配合，一人拿母種試管，在酒精燈火焰旁邊用接種鉤（鏟）將試管內斜面上菌絲塊切成小塊；另一人將原種瓶瓶口傾斜在酒精燈火焰旁，將瓶蓋掀出一個小縫，迅速將切好的一小塊母種移接到原種瓶內，瓶口用酒精燈燒一下，然后立即把原種瓶口蓋嚴、扎好。一支母種一般可接四五瓶（袋）原種。把接種好的原種瓶置于適溫下培養。<br> <br> （5）檢查接種過程中應檢查有無雜菌污染，發現污染瓶，立即挑出，滅菌淘汰。生長好的原種菌絲潔白、粗壯、純凈，可用來擴大繁殖栽培種。<br> <br> <br> 2. 棉籽殼原種的制作方法<br> （1）配方 棉籽殼（或木屑） 78%，麥麩（或米糠） 20%，過磷酸鈣或石膏 1%， <br> 蔗糖 1%。 <br> （2）拌料 按比例稱料、混合，加水拌料。混合時，先將棉籽殼和麥麩混合 <br> <br> 在一起，過磷酸鉀和蔗糖混溶在拌料用的水中。拌料時，邊加水邊攪拌，邊測試含水量。<br> （3）含水量的測定拌好料后，用手抓一把培養料，捏在手中緊握，手指縫<br> 實驗一 母種、原種、栽培種的制作 ·5·<br> 中有水浸出但無水滴下落為宜。<br> （4）裝瓶將拌好的培養料裝入原種瓶或塑料袋中，邊裝邊壓實（但不得過緊），一直裝到瓶肩處或菌種袋的 2/3處為宜。裝好培養料以后，用錐形木棒從瓶或塑料袋中央向下打一個洞，洞深距底部 2～3 cm。將瓶口和瓶外粘的培養料擦掉，以免接種后污染雜菌。用棉塞塞住瓶口或用通氣膜包住瓶口，再包一層防潮紙（或牛皮紙），用線繩將瓶口扎好，準備滅菌。<br> <br> （5）滅菌滅菌方法同麥粒培養基，壓強為 0.124～0.135 MPa，時間 1.5～2.0 h。<br> <br> （6）原種質量檢查無論麥粒原種還是棉籽殼原種，接種后在 25℃左右培養 20～40 d，菌種即可長滿瓶。品質優良的原種，菌絲潔白、純凈、有食用菌特有的香味。若出現黃、綠、黑等顏色的毛狀物或菌種瓶內有酸、臭味道，即是污染雜菌，不能使用。<br> <br> <br> （三）栽培種的制作<br> 1. 培養基的制作<br> （1）配方 棉籽殼 78%，麥麩（或米糠） 20%，過磷酸鈣（或石膏） 1%， <br> 蔗糖 1%。 <br> （2）拌料 根據比例稱取各培養料，將棉籽殼和麥麩先混合在一起，過磷 <br> <br> 酸鈣和蔗糖等混溶在拌料用的水中，攪拌均刀。培養料拌好后，測含水量，測試方法是用手抓一把培養料握在手中，用力捏緊，手指縫中有水浸出但無水滴下落為宜。<br> （3）裝袋將拌好的培養料裝入聚丙烯塑料袋中，邊裝邊壓實，裝至塑料袋容積的 3/5左右。裝好培養料后，從袋中央用錐形木棒打一孔，孔深距袋底部 2～3 cm。用塑料頸環或棉塞封口。擦凈塑料袋外面所粘的培養料。<br> 2. 滅菌<br> 栽培種數量大，可用大型立式或臥式電熱高壓蒸汽滅菌鍋滅菌。滅菌一般要求壓強 0.124～0.135 MPa，滅菌 2.0 h。<br> 3. 接種和培養<br> 將滅菌后